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redx2011

银虫 (初入文坛)

[求助] 土壤中微量DNA的提取

现在正在进行从土壤中微生物中提取DNA,但是土样中我所需要的菌体很少,或者没有,求一种可以从土壤中提取微量DNA的方法,并且可以用以后面的PCR扩增。我开始从土壤中提取到了总DNA,用的方法(SDS-CTAB法)损失比较大,而且腐殖酸的浓度偏高,而且只有稀释后才能进行 16s PCR扩增。
急求一种可以用的方法或者技术。
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以试试用无菌水洗脱你的样品,然后用滤膜收集菌体,再提DNA扩增。
處世樹為模,本固任從枝葉動;立身錢作樣,內方還要外邊圓。
2楼2013-04-09 00:38:09
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redx2011

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by WSW_Alone at 2013-04-09 00:38:09
你可以试试用无菌水洗脱你的样品,然后用滤膜收集菌体,再提DNA扩增。

是先将土壤制成悬液,然后用滤膜过滤么?
不可能在土给全部去除,到时候滤膜会被堵住??
大家一起努力
3楼2013-04-09 00:42:00
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有经费的话还是买试剂盒吧,国内的也有,OMEGA也有,效果都很好。
转向地质微生物学
4楼2013-04-09 07:49:00
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Elainebear

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我用的是qiagen家的DNA提取试剂盒
5楼2013-04-09 09:20:39
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xieweijing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试剂盒很不错,我最近在提,用的omega,加油
好好加油,为自己,也为自己以后!
6楼2013-04-09 10:16:20
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用mobio 的 powersoil 吧,提取少量DNA 效果挺好。
实验室用这个提取 擦拭皮肤的棉签  都可以做PCR 的
7楼2013-04-09 12:37:56
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wangzply

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

8楼2013-04-09 15:53:47
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by redx2011 at 2013-04-09 00:42:00
是先将土壤制成悬液,然后用滤膜过滤么?
不可能在土给全部去除,到时候滤膜会被堵住??...

之前我们这边有做冰雪微生物的,他就是用滤膜,都是几升几升的过。土壤样品的话过滤膜我没试验过,你可以考虑试试看,多洗几次。

至于说用试剂盒的话,我们实验室用了MO BIO和OMEGA的,对于比较贫瘠的土壤我们的结果是OMEGA的好些,一般的土壤,MO BIO的好且快。
處世樹為模,本固任從枝葉動;立身錢作樣,內方還要外邊圓。
9楼2013-04-09 16:55:21
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