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three姚

银虫 (小有名气)

[求助] 土壤微生物DNA提取不出来,是什么原因? 已有3人参与

本人生态学专业,分子方面略懂皮毛。用上海生工的土壤DNA提取试剂盒从土样中提DNA,按照说明书操作,前后提了四次,0.8%琼脂糖凝胶电泳,什么都没跑出来。。。。。。借用师兄的Powersoil的试剂盒又提了一次,还是什么都没有。。。。。。土样是老师给的,经过研磨等前期处理,具体的我也不清楚,不知道会有什么影响。但不管怎么样,土壤中肯定有微生物,不应该什么都提不出来啊。。。实在想不出原因, 只好请教各位,请大家帮我分析一下,是什么原因?
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kkunny

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以换个样品试一下,看看是样品的问题?试剂问题?还是操作问题?
好好学习,天天向上
2楼2012-11-25 20:16:44
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xiaoyaoyou0

铜虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试试mpbio的土壤试剂盒,也许可以,我一直用的是这个
3楼2012-11-25 20:29:06
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three姚

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kkunny at 2012-11-25 20:16:44
你可以换个样品试一下,看看是样品的问题?试剂问题?还是操作问题?

样品换过的。。。其实之前拿老师以前的样品做过,也是没结果的。。。我打算富集一下再试试
思念是一棵没有年轮的树,永不老去
4楼2012-11-26 21:59:37
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three姚

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyaoyou0 at 2012-11-25 20:29:06
试试mpbio的土壤试剂盒,也许可以,我一直用的是这个

谢了。。。不过这个得看老师有多少钱。。。。。。
思念是一棵没有年轮的树,永不老去
5楼2012-11-26 22:01:28
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xiaoyaoyou0

铜虫 (初入文坛)


6楼2012-11-28 13:34:27
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yinhongguo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

会不会是样品的量太少,我提的是水里的,之前也是什么也跑不出,后来将量增加一倍,然后就有了,另外你想想操作有没有问题
7楼2012-11-29 09:39:52
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

应该是量的问题,你问问以前他们是怎么做的
8楼2012-11-30 17:02:14
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hilihuo

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

DNA浓度多少?A260/280之类的数据如何呢?
宁愿独自沧桑
9楼2012-11-30 22:09:05
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pangzio

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

第一、土壤样品是什么,有可能里面所含的微生物就很少,所以跑胶的时候,你是不会看见清晰条带的,提取完直接进行PCR,要设置阴性对照,看里面是否有微量的DNA;
第二、生工的盒子没有配除腐植酸的试剂,也许是腐植酸影响了;
第三、你提取的土壤若盐、碱的含量高的话,一般的试剂盒很难提出来,反而手配的试剂好提取点,当然买个质量好点的盒子一下可以解决以上的问题。
10楼2012-12-22 13:41:06
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