| 查看: 2313 | 回复: 9 | ||
[求助]
引物二聚体会不会影响目的基因的迁移?
|
|
如题 简单点说：切胶的时候 会不会你切300bp的条带 实际上是350bp或250bp长？ 或者 小片段会夹杂在大片段里 你切的大片段里最终还是存在有部分小片段？ 两个疑问 大家畅所欲言吧 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有113人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 电泳图怎么全是引物二聚体？求解
已经有13人回复
- 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
已经有5人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- 引物二聚体怎么检测
已经有4人回复
- 这是引物二聚体吗？
已经有10人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- PCR条带为什么会出现引物二聚体呀？目的条带没有出现。新手不大懂~~~
已经有9人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
2楼2012-11-24 14:52:21
seanzhu1996
木虫 (著名写手)
- 应助: 182 (高中生)
- 金币: 16065.1
- 红花: 1
- 帖子: 2071
- 在线: 48.7小时
- 虫号: 1864374
- 注册: 2012-06-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-11-24 15:12:44
fendouysys
木虫 (职业作家)
- 应助: 129 (高中生)
- 金币: 3578.5
- 散金: 12
- 红花: 2
- 帖子: 3745
- 在线: 96.7小时
- 虫号: 2082401
- 注册: 2012-10-24
- 性别: GG
- 专业: 运筹与管理
4楼2012-11-24 15:16:30
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
5楼2012-11-24 18:47:59
yyk81
木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 4072.9
- 红花: 1
- 帖子: 936
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 1387477
- 注册: 2011-09-02
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
曾秀凤: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 我们也是EB后染的 所以应该片段选择比较精确 对吧 结果切胶回收后检测还是会发现目的片段里有小片段的存在 所以很困惑 2012-11-26 08:54:12
感谢参与，应助指数 +1
曾秀凤: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 我们也是EB后染的 所以应该片段选择比较精确 对吧 结果切胶回收后检测还是会发现目的片段里有小片段的存在 所以很困惑 2012-11-26 08:54:12
|
你的问题应该分3个层面回答。1，引物二聚体不影响目的产物的迁移。2，目的带的大小想精确反映在胶上，电泳时不能加核酸染料，跑完胶后在再染色，跑出来是多大就是多大，不失真，不会出现250bp看起来像300bp的情况。3，如果想分开大小很接近两条带，需要提高分辨率，提高胶浓度是个好办法。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
6楼2012-11-25 08:11:25
yyll1988
银虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 212.6
- 散金: 7
- 帖子: 361
- 在线: 181.3小时
- 虫号: 999033
- 注册: 2010-04-17
- 专业: 植物进化生物学
7楼2012-11-25 20:16:37
8楼2012-11-26 08:54:22
zhengli123
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 591.1
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 177
- 在线: 147.3小时
- 虫号: 1068301
- 注册: 2010-08-02
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2012-11-27 08:49:27
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励新人交流！ 2012-12-09 00:37:04
曾秀凤: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 你分条说的很清楚了 谢谢啊 但是呢 我切胶前后都会在凝胶成像仪上拍下照片确定切下的一定是目的条带 我们用2%的低熔点琼脂糖跑2-3h 就这样 通过芯片检测 还是会发现夹杂有小片段 呵呵 虽然对结果的影响不是很大 就只是觉得很奇怪于这种现象而已 2012-12-12 10:08:15
gyesang: 金币+1, 鼓励新人交流！ 2012-12-09 00:37:04
曾秀凤: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 你分条说的很清楚了 谢谢啊 但是呢 我切胶前后都会在凝胶成像仪上拍下照片确定切下的一定是目的条带 我们用2%的低熔点琼脂糖跑2-3h 就这样 通过芯片检测 还是会发现夹杂有小片段 呵呵 虽然对结果的影响不是很大 就只是觉得很奇怪于这种现象而已 2012-12-12 10:08:15
|
问题1：切胶的时候 会不会你切300bp的条带 实际上是350bp或250bp长？ 回答：这个是有可能的，即便你点的双个marker, 但由于凝胶的问题或者电泳系统的问题亦或者marker本身精确度不高的问题，完全有可能出现这种情况。建议在切胶前，在成像系统上看一下再切，确定你的目的产物确实存在并确定目的条带的位置，或者可以再UV板上看着切（这个要做好防护，建议还是在成像系统上看确定一下目的条带就可以了）。 问题2：小片段会夹杂在大片段里 你切的大片段里最终还是存在有部分小片段？ 回答：这个也完全可能，特别是电泳时间不够充分且存在于目的条带大小相近的非特异性扩增条带的情况下极为容易出现相近大小的条带没有完全分开，或者切胶不够精细也可能发生这样的问题。 问题3：引物二聚体是否会影响目的基因迁移？ 回答：如果你的目的条带是300bp这个不会，但是如果产物很小，小于100bp，就有可能。但是，一般普通PCR或Real-time PCR 都会建议你目的条带大于100-150bp，所以引物二聚体不会影响目的基因迁移。但是也要优化引物，尽量避免大量引物二聚体的产生，大量引物二聚体的产生会影响扩增效率。 但愿这些答案对你有帮助。 |
10楼2012-12-08 21:20:49
