应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 可变剪切体RT-PCR检测的技术问题
51/1返回列表
查看: 2584  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

章信来

木虫 (正式写手)

[求助] 可变剪切体RT-PCR检测的技术问题

各位虫友：
我有个基因存在不止一种类型可变剪切情况，当共同点是基因中间片段缺失，我想设计两端保守位的引物，采用RT-PCR的方法检测不同组织间的分布规律，如果都存在的话会同时扩增出几条大小不等的目的条带，RT-PCR结果则完全不是那么回事，所有组织只能扩增出一条最小的可变剪切体，其他的，尤其是未发生可变剪切的原始基因都扩增不出来，请各位虫友帮忙分析下原因和解决办法（PCR条件优化很多次了，不见任何改观），谢谢各位！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-23 08:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robustli at 2013-04-02 21:11:06
How do you optimize your PCR condition? I have met the same thing. I use KOD to amplify my target gene. I only got the small fragment. Later I increased the denature and primer annealing time (from 2 ...

in fact, i haven't  solve this question yet, i want to do northern-blot, your suggestion maybe work, i will try it, thanks!
the big problem of AS is how to study the function, especially the different function to wild type gene, do you have any good idea?
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-03 19:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cnb1987

银虫 (小有名气)
你好，我想问问，对于基因的不同剪切体如何鉴定？
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-02 16:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

How do you optimize your PCR condition? I have met the same thing. I use KOD to amplify my target gene. I only got the small fragment. Later I increased the denature and primer annealing time (from 20s to 25s). Interestingly, the bigger band appeared.
赞一下 回复此楼
immunologyparasite
3楼2013-04-02 21:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cnb1987 at 2013-04-02 16:19:22
你好，我想问问，对于基因的不同剪切体如何鉴定？

你是说如何确定一个基因是否存在可变剪切体对吧？
我的情况是用基因两端特异性引物做RT-PCR，电泳结果发现几条较为特异的目的片段，就克隆测序回来发现是基因mRNA中间出现缺失造成的，缺失的两端序列符合可变剪切的AT-AG原则（好像是AT-AG），所以基本上判断为AS，查阅相关文献发现哺乳动物基因可变剪切事件稀松平常，貌似超过75%以上的基因能进行AS。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-03 19:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭