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zhaohang169

新虫 (初入文坛)

[求助] 用算沉淀组织中的蛋白

我看书上貌似说沉淀蛋白除了用甲醇乙腈之类的,还可以用酸,如10%三氯乙酸,6%高氯酸,5%磷酸等,但这里面都含水呀,处理完后要进GC-MS不能进水呀。请问后续应该如何处理,这些酸真能沉淀蛋白用么?我加了5%左右的磷酸貌似没什么反应
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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jiangchunyong: 金币+1, 谢谢 2012-11-21 17:58:47
zhaohang169: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-23 09:45:10
甲醇、乙腈、10%三氯乙酸都可以  
甲醇乙腈最好用3-4倍体积的量
10%三氯乙酸可以等体积加入
但是万不得已最好不要用沉淀蛋白的方法处理样品
你看看这个帖子  前车之鉴啊
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5204742&pid=2&page=1#pid2
可以考虑用液液萃取
当然固相萃取更好  成本要高许多
2楼2012-11-21 11:15:06
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zhaohang169

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-21 11:15:06
甲醇、乙腈、10%三氯乙酸都可以  
甲醇乙腈最好用3-4倍体积的量
10%三氯乙酸可以等体积加入
但是万不得已最好不要用沉淀蛋白的方法处理样品
你看看这个帖子  前车之鉴啊
http://muchong.com/bbs/viewthread.php ...

我用液液萃取不太能把里面的东西萃取出来。试过乙酸乙酯,氯仿,丙酮,正己烷。貌似不太能。
加酸沉淀后再拿乙酸乙酯萃取貌似还可以,不过杂峰很多?是不是因为酸中只有10%是酸其余是水,水能1:10溶到乙酸乙酯中,GC-MS又不能进水,挺矛盾的。
加酸能萃取到的原因可能和酸不仅能沉淀蛋白还能调节PH使药物不能处于游离的状态能溶于乙酸乙酯等弱极性物质中;不加酸的时候我试过甲醇,乙腈的萃取率都很高。
3楼2012-11-23 09:51:16
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaohang169 at 2012-11-23 09:51:16
我用液液萃取不太能把里面的东西萃取出来。试过乙酸乙酯,氯仿,丙酮,正己烷。貌似不太能。
加酸沉淀后再拿乙酸乙酯萃取貌似还可以,不过杂峰很多?是不是因为酸中只有10%是酸其余是水,水能1:10溶到乙酸乙酯中, ...

这样你可以在液液萃取之前加一点酸溶液进样品中调一下pH值
后面的处理方法就按照正常的液液萃取来做
如果你这个不是个全新的化合物
可以参考文献中的处理方法
4楼2012-11-23 10:34:44
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