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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 生物样品 LC-MS 如何除盐？蛋白？
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)

[求助] 生物样品 LC-MS 如何除盐？蛋白？

各位虫子们：
       本人最近开始做LC-MS建立某药物的影响。因为是刚接触这一块，所以不是很懂，请虫子们帮忙~~
      具体问题：之前生物药物样品，直接甲醇沉淀除去蛋白，取上清就上样了，一开始还好，现在柱压越来越高，已经超过极限了（流速0.1ml/min都不行）。现在的想法是柱子堵了，不知道具体是蛋白还是盐分？特别是盐分去除，虫子们有什么好的建议么？（之前想过SPE小柱，但是一个样就要150+，感觉实在太贵了）现在都打算重新买色谱柱，但预处理还是在优化条件。
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1楼 2012-11-20 14:28:48
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rr.elijar: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 谢谢啦~ 不知以后有问题是否可以继续请教~ 2012-11-20 23:52:36
一般样品前处理方法
最好的是SPE  每个样品的成本大概在10-20元之间  不会到150
液液萃取比较常用  一般的化学成分  都可以采取这种方法
常用的萃取剂包括：乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、异丙醇以及它们的不同配比
如果你这个化合物不是全新的 可以查一下文献  看别人的分析方法是怎么处理的
甲醇沉淀蛋白是最伤色谱柱的处理方法
尽量不要采用
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2楼2012-11-20 14:37:21
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-20 14:37:21
一般样品前处理方法
最好的是SPE  每个样品的成本大概在10-20元之间  不会到150
液液萃取比较常用  一般的化学成分  都可以采取这种方法
常用的萃取剂包括：乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、异丙醇以及它们的 ...

甲醇沉淀是最上海色谱柱的方法怎么说？
另外，您说的SPE是一般的柱子么？比如？我说的是，针对我这个药品提取的，所以比较贵。我这个不是全新的，文献也有，但是都是过针对这个药品的柱子，我们觉得太贵了。现在甲醇沉淀的检测效果还不错，但是就是柱压不行了。。。（我们的分子量在300左右）
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3楼2012-11-20 15:01:33
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by rr.elijar at 2012-11-20 15:01:33
甲醇沉淀是最上海色谱柱的方法怎么说？
另外，您说的SPE是一般的柱子么？比如？我说的是，针对我这个药品提取的，所以比较贵。我这个不是全新的，文献也有，但是都是过针对这个药品的柱子，我们觉得太贵了。现在甲 ...

甲醇很难将蛋白沉淀完全
不知道你现在血浆和甲醇的体积比是多少
一般最少3倍体积甲醇
但是离心后的上清  继续加甲醇 应该还会产生沉淀  也就是说上清中还有蛋白
蛋白对色谱柱的损伤最大  一般情况下盐的可能性不大  如果是盐使得柱压升高   可以用高比例的水相冲洗开
不知道你这是什么化合物  你可以试试文献的方法
一般的小分子 不必要非得选择特异性的SPE柱  个人意见  之前我做的一个多肽的化合物   也是用的waters家的HLB常规SPE柱处理的  回收还可以
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4楼2012-11-20 15:09:16
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-20 15:09:16
甲醇很难将蛋白沉淀完全
不知道你现在血浆和甲醇的体积比是多少
一般最少3倍体积甲醇
但是离心后的上清  继续加甲醇 应该还会产生沉淀  也就是说上清中还有蛋白
蛋白对色谱柱的损伤最大  一般情况下盐的可能性 ...

原来如此，我们比例是1：4.5 但是之后也在上清再加过甲醇，可是已经没有沉淀了吧，不知你们是怎么添加的？
这样啊，我们有过夜冲洗柱子，但是效果不行，柱压还是很高
另外，我听说乙酸乙酯可以除盐，不知道是否可行？
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5楼2012-11-20 23:49:37
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by rr.elijar at 2012-11-20 23:49:37
原来如此，我们比例是1：4.5 但是之后也在上清再加过甲醇，可是已经没有沉淀了吧，不知你们是怎么添加的？
这样啊，我们有过夜冲洗柱子，但是效果不行，柱压还是很高
另外，我听说乙酸乙酯可以除盐，不知道是否可 ...

这种情况一般不是盐堵的
可能还是蛋白
可以将柱子反过来接
用10%异丙醇水冲洗  一定要小流速 否则会超压  一般调整为正常流速的0.1-0.2倍比较合适
冲洗1-2个小时
再看看压力是否正常
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6楼2012-11-21 08:31:25
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-21 08:31:25
这种情况一般不是盐堵的
可能还是蛋白
可以将柱子反过来接
用10%异丙醇水冲洗  一定要小流速 否则会超压  一般调整为正常流速的0.1-0.2倍比较合适
冲洗1-2个小时
再看看压力是否正常...

好的，谢谢！
做个实验真是愁人 啊·~
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7楼2012-11-21 14:01:00
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丫♀丫

金虫 (小有名气)
最好在柱子前面加一个预柱保护
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8楼2013-01-04 14:28:08
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