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rr.elijar

新虫 (初入文坛)

[求助] 生物样品 LC-MS 如何除盐?蛋白?

各位虫子们:
       本人最近开始做LC-MS建立某药物的影响。因为是刚接触这一块,所以不是很懂,请虫子们帮忙~~
      具体问题:之前生物药物样品,直接甲醇沉淀除去蛋白,取上清就上样了,一开始还好,现在柱压越来越高,已经超过极限了(流速0.1ml/min都不行)。现在的想法是柱子堵了,不知道具体是蛋白还是盐分?特别是盐分去除,虫子们有什么好的建议么?(之前想过SPE小柱,但是一个样就要150+,感觉实在太贵了)现在都打算重新买色谱柱,但预处理还是在优化条件。
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rr.elijar: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 谢谢啦~ 不知以后有问题是否可以继续请教~ 2012-11-20 23:52:36
一般样品前处理方法
最好的是SPE  每个样品的成本大概在10-20元之间  不会到150
液液萃取比较常用  一般的化学成分  都可以采取这种方法
常用的萃取剂包括:乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、异丙醇以及它们的不同配比
如果你这个化合物不是全新的 可以查一下文献  看别人的分析方法是怎么处理的
甲醇沉淀蛋白是最伤色谱柱的处理方法
尽量不要采用
2楼2012-11-20 14:37:21
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-20 14:37:21
一般样品前处理方法
最好的是SPE  每个样品的成本大概在10-20元之间  不会到150
液液萃取比较常用  一般的化学成分  都可以采取这种方法
常用的萃取剂包括:乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、异丙醇以及它们的 ...

甲醇沉淀是最上海色谱柱的方法怎么说?
另外,您说的SPE是一般的柱子么?比如?我说的是,针对我这个药品提取的,所以比较贵。我这个不是全新的,文献也有,但是都是过针对这个药品的柱子,我们觉得太贵了。现在甲醇沉淀的检测效果还不错,但是就是柱压不行了。。。(我们的分子量在300左右)
3楼2012-11-20 15:01:33
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by rr.elijar at 2012-11-20 15:01:33
甲醇沉淀是最上海色谱柱的方法怎么说?
另外,您说的SPE是一般的柱子么?比如?我说的是,针对我这个药品提取的,所以比较贵。我这个不是全新的,文献也有,但是都是过针对这个药品的柱子,我们觉得太贵了。现在甲 ...

甲醇很难将蛋白沉淀完全
不知道你现在血浆和甲醇的体积比是多少
一般最少3倍体积甲醇
但是离心后的上清  继续加甲醇 应该还会产生沉淀  也就是说上清中还有蛋白
蛋白对色谱柱的损伤最大  一般情况下盐的可能性不大  如果是盐使得柱压升高   可以用高比例的水相冲洗开
不知道你这是什么化合物  你可以试试文献的方法
一般的小分子 不必要非得选择特异性的SPE柱  个人意见  之前我做的一个多肽的化合物   也是用的waters家的HLB常规SPE柱处理的  回收还可以
4楼2012-11-20 15:09:16
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-20 15:09:16
甲醇很难将蛋白沉淀完全
不知道你现在血浆和甲醇的体积比是多少
一般最少3倍体积甲醇
但是离心后的上清  继续加甲醇 应该还会产生沉淀  也就是说上清中还有蛋白
蛋白对色谱柱的损伤最大  一般情况下盐的可能性 ...

原来如此,我们比例是1:4.5 但是之后也在上清再加过甲醇,可是已经没有沉淀了吧,不知你们是怎么添加的?
这样啊,我们有过夜冲洗柱子,但是效果不行,柱压还是很高
另外,我听说乙酸乙酯可以除盐,不知道是否可行?
5楼2012-11-20 23:49:37
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rr.elijar at 2012-11-20 23:49:37
原来如此,我们比例是1:4.5 但是之后也在上清再加过甲醇,可是已经没有沉淀了吧,不知你们是怎么添加的?
这样啊,我们有过夜冲洗柱子,但是效果不行,柱压还是很高
另外,我听说乙酸乙酯可以除盐,不知道是否可 ...

这种情况一般不是盐堵的
可能还是蛋白
可以将柱子反过来接
用10%异丙醇水冲洗  一定要小流速 否则会超压  一般调整为正常流速的0.1-0.2倍比较合适
冲洗1-2个小时
再看看压力是否正常
6楼2012-11-21 08:31:25
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-11-21 08:31:25
这种情况一般不是盐堵的
可能还是蛋白
可以将柱子反过来接
用10%异丙醇水冲洗  一定要小流速 否则会超压  一般调整为正常流速的0.1-0.2倍比较合适
冲洗1-2个小时
再看看压力是否正常...

好的,谢谢!
做个实验真是愁人 啊·~
7楼2012-11-21 14:01:00
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丫♀丫

金虫 (小有名气)

最好在柱子前面加一个预柱保护
8楼2013-01-04 14:28:08
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