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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

[交流] 关于重组基因的问题

各位大侠，我现在的目的基因P不出来，我现在想进行目的基因合成，请给位大侠帮我分析一下，合成的目的基因转化到大肠杆菌中会否可行，和正常P出来的是否一样？酶活是比P出来的高还是低，还有，有没有人曾经这么弄过，希望加我QQ号，大家可以一起探讨这个问题！
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1楼 2012-10-29 09:25:07
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-29 15:53:55
跟PCR产物相比，应该合成的基因序列在大肠杆菌中表达效率更高，因为在基因序列合成之前通常根据大肠杆菌密码子的偏好性做序列的优化处理使之能够通畅表达。
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2楼2012-10-29 11:25:04
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
zhege
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3楼2012-10-29 12:10:06
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
可以做啊
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4楼2012-10-29 12:37:04
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
合成和你P出来的基因会有不同吗？最后都是连接到载体然后转化到大肠杆菌里面，酶活高不高能不能表达之类的，主要是看载体构建的时候考虑周全不周全，序列有没有错，优化有没有做好吧
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5楼2012-11-01 10:47:16
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
我经常做这个，合成基因只是优化一下密码子，通过提高表达量以提高酶活，对酶本身来说是没有什么改变的。
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6楼2012-11-01 12:52:53
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zishilanxuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xl0071334 at 2012-11-01 12:52:53
我经常做这个，合成基因只是优化一下密码子，通过提高表达量以提高酶活，对酶本身来说是没有什么改变的。

那你合成的基因是怎么合成，是光合成目的基因片段，还是加上保守序列？或者是直接合成出粘性末端？希望能够指点一下。毕竟合成基因还是很贵的，谢谢
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7楼2012-11-07 08:46:06
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把你你需要表达的基因发给合成公司就可以了，两端包括粘性末端。合成公司合成好之后会把基因连接到克隆载体发给你。你只需要将基因切下连接到表达载体就可以表达了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-11-07 09:39:13
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