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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qq677556

新虫 (初入文坛)


[交流] 关于DNA提取

蛋白酶K-CTAB法
(1)加入DNA提取液,37度水浴1h;
(2)加入蛋白酶K,37度水浴1h;
(3)加入SDS,65度水浴1h;
(4)离心,取上清;
(5)加入氯仿异戊醇,离心,取上层液体,重复一次;
(6)加入异丙醇沉淀过夜;
(7)离心,弃上清,预冷乙醇洗涤两次,自然吹干,加ddH2O溶解即可。
溶菌酶法
(1)样品加入溶菌酶溶液(pH8.0),蛋白酶k,37℃,200r,1h;
(2)加入裂解液,磷酸缓冲液,氯仿异戊醇,65℃,10min,离心取上清;
(3)加入异丙醇,冰浴沉淀1h;
(4)离心,加入预冷乙醇洗涤;
(5)离心,弃上清,自然风干。
好心人给我讲讲这两种方法各自前三步的具体作用,和区别。
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)



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蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,在pH 4到pH 12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。
5楼2012-10-30 14:01:46
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jl860822

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-10-29 16:04:06
这个问题比较难回答,提取DNA无非就是先裂解细胞,然后加DNase抑制剂以防止DNA降解,然后加蛋白酶去蛋白,然后把DNA沉淀出来,通常会有一个37℃水浴去RNA的过程,至于方法的区别,建议去找一本分子克隆看一下
2楼2012-10-29 14:54:12
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枫叶丹

新虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-29 16:04:18
蛋白酶K-CTAB法
DNA提取液:裂解菌体
蛋白酶K:降解天然蛋白质,去除DNA和RNA制备中的核酸酶
SDS:使蛋白质变性沉淀
溶菌酶法
溶菌酶溶液(pH8.0):水解菌体细胞壁
裂解液:分解菌体细胞膜,使蛋白质变性
磷酸缓冲液:调解PH,易于DNA沉淀
氯仿异戊醇:使蛋白质变性,分离出dna
异丙醇:沉淀剂

我觉得这两种方法大同小异,用的原理都差不多,只是步骤上有所不同而已
3楼2012-10-29 15:21:46
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liuyuetq

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
个人认为 如果是提取细菌的DNA 第二种方法更适合革兰氏阳性菌
4楼2012-10-30 08:35:20
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