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qq677556

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于DNA提取

蛋白酶K-CTAB法
（1）加入DNA提取液，37度水浴1h；
（2）加入蛋白酶K，37度水浴1h；
（3）加入SDS，65度水浴1h；
（4）离心，取上清；
（5）加入氯仿异戊醇，离心，取上层液体，重复一次；
（6）加入异丙醇沉淀过夜；
（7）离心，弃上清，预冷乙醇洗涤两次，自然吹干，加ddH2O溶解即可。
溶菌酶法
（1）样品加入溶菌酶溶液(pH8.0)，蛋白酶k，37℃，200r，1h；
（2）加入裂解液，磷酸缓冲液，氯仿异戊醇，65℃，10min，离心取上清；
（3）加入异丙醇，冰浴沉淀1h；
（4）离心，加入预冷乙醇洗涤；
（5）离心，弃上清，自然风干。
好心人给我讲讲这两种方法各自前三步的具体作用，和区别。
谢
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1楼 2012-10-29 00:18:30
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jl860822

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-10-29 16:04:06
这个问题比较难回答，提取DNA无非就是先裂解细胞，然后加DNase抑制剂以防止DNA降解，然后加蛋白酶去蛋白，然后把DNA沉淀出来，通常会有一个37℃水浴去RNA的过程，至于方法的区别，建议去找一本分子克隆看一下
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2楼2012-10-29 14:54:12
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枫叶丹

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-29 16:04:18
蛋白酶K-CTAB法
DNA提取液：裂解菌体
蛋白酶K：降解天然蛋白质，去除DNA和RNA制备中的核酸酶
SDS：使蛋白质变性沉淀
溶菌酶法
溶菌酶溶液(pH8.0）：水解菌体细胞壁
裂解液：分解菌体细胞膜，使蛋白质变性
磷酸缓冲液：调解PH，易于DNA沉淀
氯仿异戊醇：使蛋白质变性，分离出dna
异丙醇:沉淀剂

我觉得这两种方法大同小异，用的原理都差不多，只是步骤上有所不同而已
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3楼2012-10-29 15:21:46
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liuyuetq

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人认为 如果是提取细菌的DNA 第二种方法更适合革兰氏阳性菌
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4楼2012-10-30 08:35:20
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，在pH 4到pH 12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。
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5楼2012-10-30 14:01:46
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简简单单qa

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有试剂盒的尽量用试剂盒，感觉比手提的效果好
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6楼2012-10-30 21:06:44
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竹子小小

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我怎么感觉其实都差不多，就是想办法把细胞破掉。CTAB、溶菌酶，蛋白酶K，裂解液，SDS这些东西都作用无非都是裂解细胞释放DNA，完全可以随意搭配使用。
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7楼2012-10-30 21:25:46
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)
用试剂盒吧，效率比较高
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8楼2012-10-30 21:42:16
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xy312925

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 简简单单qa at 2012-10-30 21:06:44
有试剂盒的尽量用试剂盒，感觉比手提的效果好

同意LZ观点
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9楼2012-10-31 17:13:50
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