应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNA提取
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 1461  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qq677556

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于DNA提取

蛋白酶K-CTAB法
（1）加入DNA提取液，37度水浴1h；
（2）加入蛋白酶K，37度水浴1h；
（3）加入SDS，65度水浴1h；
（4）离心，取上清；
（5）加入氯仿异戊醇，离心，取上层液体，重复一次；
（6）加入异丙醇沉淀过夜；
（7）离心，弃上清，预冷乙醇洗涤两次，自然吹干，加ddH2O溶解即可。
溶菌酶法
（1）样品加入溶菌酶溶液(pH8.0)，蛋白酶k，37℃，200r，1h；
（2）加入裂解液，磷酸缓冲液，氯仿异戊醇，65℃，10min，离心取上清；
（3）加入异丙醇，冰浴沉淀1h；
（4）离心，加入预冷乙醇洗涤；
（5）离心，弃上清，自然风干。
好心人给我讲讲这两种方法各自前三步的具体作用，和区别。
谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

科技

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-10-29 00:18:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-10-29 16:04:06
这个问题比较难回答，提取DNA无非就是先裂解细胞，然后加DNase抑制剂以防止DNA降解，然后加蛋白酶去蛋白，然后把DNA沉淀出来，通常会有一个37℃水浴去RNA的过程，至于方法的区别，建议去找一本分子克隆看一下
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-29 14:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶丹

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-29 16:04:18
蛋白酶K-CTAB法
DNA提取液：裂解菌体
蛋白酶K：降解天然蛋白质，去除DNA和RNA制备中的核酸酶
SDS：使蛋白质变性沉淀
溶菌酶法
溶菌酶溶液(pH8.0）：水解菌体细胞壁
裂解液：分解菌体细胞膜，使蛋白质变性
磷酸缓冲液：调解PH，易于DNA沉淀
氯仿异戊醇：使蛋白质变性，分离出dna
异丙醇:沉淀剂

我觉得这两种方法大同小异，用的原理都差不多，只是步骤上有所不同而已
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-29 15:21:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuetq

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人认为 如果是提取细菌的DNA 第二种方法更适合革兰氏阳性菌
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-30 08:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小逍遥人

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，在pH 4到pH 12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-30 14:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简简单单qa

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有试剂盒的尽量用试剂盒，感觉比手提的效果好
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-10-30 21:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子小小

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我怎么感觉其实都差不多，就是想办法把细胞破掉。CTAB、溶菌酶，蛋白酶K，裂解液，SDS这些东西都作用无非都是裂解细胞释放DNA，完全可以随意搭配使用。
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-30 21:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyingaza

木虫 (著名写手)
用试剂盒吧，效率比较高
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-30 21:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy312925

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 简简单单qa at 2012-10-30 21:06:44
有试剂盒的尽量用试剂盒，感觉比手提的效果好

同意LZ观点
回复此楼
9楼2012-10-31 17:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员T1xRo5 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 物理学调剂 +3 小羊36 2026-03-30 3/150 2026-03-31 09:20 by jp9609
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 311求调剂 +7 蓝月亮亮 2026-03-30 7/350 2026-03-30 19:24 by 无际的草原
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +18 Mr. Z 2026-03-25 19/950 2026-03-30 19:01 by Wang200018
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +7 redcom 2026-03-29 7/350 2026-03-30 12:44 by 爱搞研究的小孩
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +7 闫旭东 2026-03-28 9/450 2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭