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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] SDS-PAGE跑得很难看,请高手分析

SDS-PAGE跑得很难看,请高手分析:
10%的分离胶,4%的浓缩胶,电压:分离胶120V浓缩胶80V,缓冲液刚配的,在浓缩时没有浓缩成一条线,很粗。请高手分析!
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-30 11:09:59
简单评价下,你可能配胶的AB出现问题了
胶没好好凝,玻璃板没好好洗干净。。。
然后就是可能你的蛋白量有点大,有的孔可能没有,你MARKER都被你挤得很丑了。。。
最大就是胶没凝好
电泳液的pH有么有调。。。
一 ...

你可能配胶的AB出现问题了??是AP?还是???
蛋白不大的只有30KD
7楼2012-10-30 13:21:33
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meihuayi

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确实够难看的,不过我也跑过更难看的。没听说其他办法,你把制胶的buffer全部用新的配制,跑胶buffer换新的吧
只是在在交流中才能碰撞出火花
2楼2012-10-27 22:09:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流问题 2012-10-28 17:49:09
感觉是胶做的不行,可能样品也没处理好。首先检查制胶缓冲液的pH是否正确,把做胶的所有溶液配好后过滤。你的上样量是多少,体积?上样前是否离心?分离胶凝的速度。如果浓缩不好,可能是浓缩胶Tris pH不对,或者是上样buffer的pH不对,还可能是上样体积过大而浓缩胶过短。
3楼2012-10-28 03:29:02
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-10-28 17:49:43
个人几点建议,仅供参考!
1.分离胶凝固之后,在灌注浓缩胶之前一定要把液封的水尽量的用折过的滤纸吸净;
2.拔梳子的时候两边用力均匀些,不要把胶孔弄的大小不一;
3.电泳的时候前沿指示剂(溴酚蓝)的条带过了浓缩胶后,可适当降低电压到80-90V;
4.第五、第六泳道的样品处理的不好,每次用之前都要沸水浴10min,而且可以适当减少上样量。
4楼2012-10-28 15:34:06
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