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yjwjy

木虫 (小有名气)

凡人

[求助] RT-PCR结果分析求助

同一个引物，做RT-PCR在三个不同的材料里面扩增出这个结果，第一个材料有两条带，其他两个材料只有一条带，怎么解释？

11.jpg
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平平淡淡挺好！
1楼 2012-10-26 20:30:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yjwjy: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复！！ 2012-10-27 08:43:52
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:54:06
你的材料是真核还是原核生物的？你引物怎么设计的，扩增片段在基因组DNA是否包含内含子？觉得象是第一个RNA样品有基因组DNA污染。
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2楼2012-10-27 07:10:29
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yjwjy

木虫 (小有名气)

凡人
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-27 07:10:29
你的材料是真核还是原核生物的？你引物怎么设计的，扩增片段在基因组DNA是否包含内含子？觉得象是第一个RNA样品有基因组DNA污染。

谢谢！！但是这个材料用其他引物扩增的时候只有一条引物，而且如果扩增片段在基因组DNA有内含子的话，用DNA扩增出来的片段应该比cDNA中的目标片段大才对啊！！
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平平淡淡挺好！
3楼2012-10-27 08:42:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
yjwjy: 金币+4, ★★★很有帮助, 可以去试试！ 2012-10-28 08:03:32
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-28 17:41:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by yjwjy at 2012-10-27 08:42:40
谢谢！！但是这个材料用其他引物扩增的时候只有一条引物，而且如果扩增片段在基因组DNA有内含子的话，用DNA扩增出来的片段应该比cDNA中的目标片段大才对啊！！...

所以我问一下具体的材料及引物的设计以排除是否是基因组DNA的污染，你可以用这对引物把基因组DNA也P一下。其他引物P不出基因组带也不一定不是DNA污染问题，因为如果DNase消化不完全会留下不同的DNA残片，有些基因能P出来，有些就P不出来。还有根据你说的，你的图片是放反了吗，难道说上面的那条带是小分子量的？
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4楼2012-10-28 02:52:36
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yjwjy

木虫 (小有名气)

凡人
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-28 02:52:36
所以我问一下具体的材料及引物的设计以排除是否是基因组DNA的污染，你可以用这对引物把基因组DNA也P一下。其他引物P不出基因组带也不一定不是DNA污染问题，因为如果DNase消化不完全会留下不同的DNA残片，有些基因能 ...

是的，不好意思，就是放反的，点样孔在西面，呵呵。通过和别人交流，是不是可以考虑可变剪切的情况啊？
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平平淡淡挺好！
5楼2012-10-28 07:46:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yjwjy: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢了！ 2012-11-02 14:41:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjwjy at 2012-10-28 07:46:37
是的，不好意思，就是放反的，点样孔在西面，呵呵。通过和别人交流，是不是可以考虑可变剪切的情况啊？...

如果排除了样品的问题的话，有可能是可变剪接。
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6楼2012-10-28 09:19:39
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