应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western总蛋白提取时需要胞内蛋白和一个膜上受体蛋白，要不要最后一步高速离心？
51/1返回列表
查看: 1821  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

AMU_801

银虫 (小有名气)

[求助] Western总蛋白提取时需要胞内蛋白和一个膜上受体蛋白，要不要最后一步高速离心？ 已有2人参与

我以前的方法是
弃原培养基---预冷PBS漂洗---刮刀收集至1.5mlEP管---1000rpm离心5min---预冷PBS洗涤---2000rpm离心5min---弃尽管内液体，加入60ul裂解液---冰上裂解30min---12000rpm离心5min---收集上清得总蛋白溶液

今天老师说这样会损失我需要的那个膜上受体蛋白，换方法
弃原培养基---预冷PBS漂洗---加入100ul裂解液，冰上5min---刮刀收集至EP管，冰上10min

老师意思不要最后一步高速离心 以免损失膜蛋白 总觉得这样做心里没底 求助前线战友们的意见
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
【空】
1楼 2012-10-24 14:50:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实如果你选用hepa强的裂解液，基本上就没啥碎片了，高速离心也就没啥作用了，全都用了都没事儿。
总蛋白里面的膜蛋白也是有的，当然不如kit富集的集中。
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-14 13:31:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

现在很多公司都有专门的提取膜蛋白的试剂，你可以尝试一下，不推荐哪个品牌了，以免有宣传的嫌疑
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-29 15:09:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你老师说的有道理，但不妨试试膜蛋白提取试剂盒
赞一下 回复此楼
不是風動，亦非幡動，仁者心動
3楼2012-10-30 10:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seasonin

银虫 (小有名气)
同问 同问 我也要从膜上找蛋白受体 最后你的膜蛋白提到了吗？还是用总蛋白做的免疫共沉淀呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-18 10:44:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 考博求助 10+3 社会实践对别 2026-11-08 3/150 2026-11-13 14:04 by 沐小虫252
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-13 11:08 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 9/450 2026-11-13 11:02 by Equinoxhua
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-13 10:55 by Equinoxhua
[考博] 27博士 +5 锦鲤送福至 2026-11-10 5/250 2026-11-13 06:22 by wlf1982
[考博] 博士申请 +4 z_l_l_666 2026-11-06 4/200 2026-11-13 06:19 by wlf1982
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:25 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:41 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 09:52 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:24 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭