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水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何根据保守序列将基因片段克隆出来

各位大侠:
    本人最近在做一个酶的PCR,不知道酶的氨基酸序列,但是根据得到的一些数据,我们推测为普鲁兰酶,并根据这个酶的保守序列设计了一些兼并引物,想得到一些核酸序列然后进行RACE以得到全基因序列,问题是第一步PCR就没进展,一直P不出来,要不P出来的就是基因组上的一些东西,跟这个酶没一点儿关系,所以寻求大家的帮助,常做这方面的虫友们帮帮忙吧  不胜感激 O(∩_∩)O~
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-10-12 14:38:29
怎么会呢?应该很成熟的技术了...注意多找些序列,然后比较同源性..选取高度保守的位置设计兼并引物...
7楼2012-10-09 23:44:54
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 水墨蓝 at 2012-10-10 11:17:24
您做这方面是不是挺熟的?兼并引物PCR扩增不出来主要跟什么有关呢?引物最多不超过几个兼并碱基啊?偶是菜鸟,多多指教哈...

3'一定要选个保守的一致的碱基配对吧...
12楼2012-10-10 12:12:09
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