7楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-10-09 23:44:54
怎么会呢？应该很成熟的技术了...注意多找些序列，然后比较同源性..选取高度保守的位置设计兼并引物...

11楼: Originally posted by 水墨蓝 at 2012-10-10 11:17:24
您做这方面是不是挺熟的？兼并引物PCR扩增不出来主要跟什么有关呢？引物最多不超过几个兼并碱基啊？偶是菜鸟，多多指教哈...

6楼: Originally posted by xzx018 at 2012-10-09 10:48:02
为什么你说的和codehop的恰恰相反啊，codehop设计出来的都是5端确定 3端兼并...

10楼: Originally posted by 水墨蓝 at 2012-10-10 11:14:38
兼并引物的设计和PCR有什么好的方法吗？第一次做这方面的东西，好多不懂，呵呵...

13楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-10-10 21:54:54
简并度高扩增难度越大，特别是3端最后3个核酸最好不要简并，我不知道你筛选的普鲁兰酶有没有什么平板筛选方法，要是有的话你可以将基因组随机酶切为几kb的片段构建基因组DNA文库，直接功能筛选获取全长基因。...

15楼: Originally posted by 水墨蓝 at 2012-10-11 10:48:24
不知道目的基因内部是否有相应的酶切位点，内切酶的选取不是要摸索一段时间？而且这样随即切，做转化不是工作量特别大吗？...

8楼: Originally posted by 水墨蓝 at 2012-10-10 13:11:25
我是把产酶菌株的基因组提了出来，然后拿基因组为模板进行的扩增。。。...