| 查看: 1810 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
celia2012铜虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR反应体系 已有1人参与
|
||
|
最近在做RTPCR，做对照的总是在30个循环做样出现CT值，总觉得是污染了，试了各种方法还是这样，怀疑有引物二聚体产生，请问反应体系中如果模板浓度叫高，是加大引物量还是减少， 之前做的反应体系为：SYBR MIX:10UL 引物：0.8ul 水：7.4微升 做338f-518r引物CT值大概在12,13左，模板浓度较高，如何优化体系 |
回复此楼» 猜你喜欢
284求调剂
已经有10人回复
-
一志愿山东大学药学学硕求调剂
已经有4人回复
-
07化学280分求调剂
已经有4人回复
-
298-一志愿中国农业大学-求调剂
已经有12人回复
-
求材料，环境专业调剂
已经有3人回复
-
335求调剂
已经有5人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
一志愿吉大化学322求调剂
已经有4人回复
-
环境学硕288求调剂
已经有8人回复
-
341求调剂(一志愿湖南大学070300)
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR标准体系有关问题。。求高手解答
已经有5人回复
- PCR产物纯化与回收
已经有10人回复
- PCR总是无法正确扩增所需片段，问题在哪？
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系请教！
已经有13人回复
- 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系的配制
已经有11人回复
- 【求助/交流】做过大引物全质粒PCR的进来看
已经有29人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR污染判定
已经有18人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
celia2012: 金币+4 2012-09-25 13:07:11
感谢参与，应助指数 +1
celia2012: 金币+4 2012-09-25 13:07:11
| 你的问题不是很清楚。如果你觉得你用做反转录的RNA有DNA污染，需要优化DNase消化的条件。反转录时做负对照，用于检测RNA样品中的痕量DNA污染。至于你说的模板浓度较高，你可以根据情况稀释。我一般是用1ug RNA做反转录，稀释5倍后取1ul做PCR。这只是一般而言，丰度很高或者很低的mRNA要根据情况稀释。还有你给出了引物的体积，不知道你用的引物浓度多少。一般RTPCR采用终浓度为0.2-0.5uM。如果你认为有引物二聚体产生，可以适当降低引物浓度。 |
3楼2012-09-25 07:17:52
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
- 应助: 131 (高中生)
- 金币: 1973.2
- 红花: 10
- 帖子: 418
- 在线: 88.3小时
- 虫号: 1067565
- 注册: 2010-08-01
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
2楼2012-09-24 18:47:59
mamadexiao
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 3
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 5603.5
- 散金: 100
- 红花: 7
- 帖子: 418
- 在线: 78.8小时
- 虫号: 576831
- 注册: 2008-06-21
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-09-25 15:47:36
mao19881205
金虫 (小有名气)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 981.4
- 散金: 149
- 红花: 2
- 帖子: 174
- 在线: 68.5小时
- 虫号: 1367660
- 注册: 2011-08-13
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2012-09-25 15:49:17
