| 查看: 1987 | 回复: 5 | |||
celia2012铜虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR反应体系 已有1人参与
|
|
最近在做RTPCR，做对照的总是在30个循环做样出现CT值，总觉得是污染了，试了各种方法还是这样，怀疑有引物二聚体产生，请问反应体系中如果模板浓度叫高，是加大引物量还是减少， 之前做的反应体系为：SYBR MIX:10UL 引物：0.8ul 水：7.4微升 做338f-518r引物CT值大概在12,13左，模板浓度较高，如何优化体系 |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有49人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有21人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有5人回复
-
国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率
已经有8人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有7人回复
-
filecode
已经有10人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有11人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有8人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有37人回复
-
好奇怪的filecode
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR标准体系有关问题。。求高手解答
已经有5人回复
- PCR产物纯化与回收
已经有10人回复
- PCR总是无法正确扩增所需片段，问题在哪？
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系请教！
已经有13人回复
- 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系的配制
已经有11人回复
- 【求助/交流】做过大引物全质粒PCR的进来看
已经有29人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR污染判定
已经有18人回复
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
- 应助: 131 (高中生)
- 金币: 1973.2
- 红花: 10
- 帖子: 418
- 在线: 88.3小时
- 虫号: 1067565
- 注册: 2010-08-01
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
2楼2012-09-24 18:47:59
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
celia2012: 金币+4 2012-09-25 13:07:11
感谢参与，应助指数 +1
celia2012: 金币+4 2012-09-25 13:07:11
| 你的问题不是很清楚。如果你觉得你用做反转录的RNA有DNA污染，需要优化DNase消化的条件。反转录时做负对照，用于检测RNA样品中的痕量DNA污染。至于你说的模板浓度较高，你可以根据情况稀释。我一般是用1ug RNA做反转录，稀释5倍后取1ul做PCR。这只是一般而言，丰度很高或者很低的mRNA要根据情况稀释。还有你给出了引物的体积，不知道你用的引物浓度多少。一般RTPCR采用终浓度为0.2-0.5uM。如果你认为有引物二聚体产生，可以适当降低引物浓度。 |
3楼2012-09-25 07:17:52
mamadexiao
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 3
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 5603.5
- 散金: 100
- 红花: 7
- 帖子: 418
- 在线: 78.8小时
- 虫号: 576831
- 注册: 2008-06-21
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-09-25 15:47:36
mao19881205
金虫 (小有名气)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 981.4
- 散金: 149
- 红花: 2
- 帖子: 174
- 在线: 68.5小时
- 虫号: 1367660
- 注册: 2011-08-13
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2012-09-25 15:49:17
6楼2019-02-03 09:50:18
