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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » QPCR扩增效率
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yicao917

木虫 (小有名气)

[交流] QPCR扩增效率

我做miRNA颈环引物的QPCR，用颈环引物和随机引物一起反转，反转后QPCR测miRNA和他调控的基因RNA水平，发现编码基因的QRT扩增效率接近2，而miRNA的扩增效率全高于2，不知道是什么原因，我退火温度是64℃，大家说如果我退火温度比较高的话有没有可能在一个循环内多次起始循环造成扩增效率太高？
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1楼 2012-09-18 23:35:30
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
http://www.biobars.cn/a/jishu/PCRshiyan/20110618/7374.html
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4楼2012-09-19 06:52:24
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gcworm

木虫 (职业作家)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
路过，帮你顶一下
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16楼2012-09-19 11:35:06
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junminh

铜虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
MIRNA直接加颈环P就OK了，随机引物加入是作QP参照？
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17楼2012-09-19 16:35:46
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yicao917

木虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by junminh at 2012-09-19 16:35:46
MIRNA直接加颈环P就OK了，随机引物加入是作QP参照？

是为了顺便检测下靶基因
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18楼2012-09-19 18:54:04
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junminh

铜虫 (小有名气)
是否有文献或者验证实验，对随时引物的引入对实验是否有影响？
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20楼2012-09-20 10:09:03
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xw19880905

新虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
我也想问楼主的这个问题
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22楼2012-09-20 16:00:14
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yicao917

木虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by junminh at 2012-09-20 10:09:03
是否有文献或者验证实验，对随时引物的引入对实验是否有影响？

没有，我只是摸一下条件
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24楼2012-09-20 20:05:30
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fuqiang001

金虫 (小有名气)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
路要靠自己走，但要用上你所有的力量！
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25楼2012-09-21 00:45:33
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dongrh1981

金虫 (正式写手)
★
yicao917(金币+1): 谢谢参与
要看你Q-PCR用的是什么方法，如果是绝对定量的话，应该就是这样的结果，如果是相对定量的话要先确定两套目的和内参的扩增效率一致，否则相对定量的值是不准的。同理，从RNA到cDNA的过程也最好是随机引物，有针对性的特异引物会放大目的与内参的定量误差。
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27楼2013-01-06 10:41:29
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goingabroad2楼
2012-09-19 01:13   回复  
yicao917(金币+1): 谢谢参与
mercivous3楼
2012-09-19 02:26   回复  
yicao917(金币+1): 谢谢参与
laicunyuan5楼
2012-09-19 07:44   回复  
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燃烧de笑6楼
2012-09-19 07:51   回复  
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9108839747楼
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gengxin608楼
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555jsj9楼
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花尖尖10楼
2012-09-19 08:24   回复  
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lhmengxiang11楼
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liyangsoton12楼
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taotaower13楼
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yxu198614楼
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tangbohejin15楼
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假大空19楼
2012-09-19 19:22   回复  
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wuge41521楼
2012-09-20 10:37   回复  
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yingying158823楼
2012-09-20 16:21   回复  
yicao917(金币+1): 谢谢参与
祝福！
yhtao26楼
2012-09-21 05:30   回复  
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