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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yicao917

木虫 (小有名气)


[交流] QPCR扩增效率

我做miRNA颈环引物的QPCR,用颈环引物和随机引物一起反转,反转后QPCR测miRNA和他调控的基因RNA水平,发现编码基因的QRT扩增效率接近2,而miRNA的扩增效率全高于2,不知道是什么原因,我退火温度是64℃,大家说如果我退火温度比较高的话有没有可能在一个循环内多次起始循环造成扩增效率太高?
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dongrh1981

金虫 (正式写手)



yicao917(金币+1): 谢谢参与
要看你Q-PCR用的是什么方法,如果是绝对定量的话,应该就是这样的结果,如果是相对定量的话要先确定两套目的和内参的扩增效率一致,否则相对定量的值是不准的。同理,从RNA到cDNA的过程也最好是随机引物,有针对性的特异引物会放大目的与内参的定量误差。
27楼2013-01-06 10:41:29
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userhung

禁虫 (文学泰斗)


4楼2012-09-19 06:52:24
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