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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母电转化问题求助
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+10 2012-09-17 17:02:40
1949stone: 回帖置顶 2012-09-17 17:24:13
1949stone: MolEPI+1, 热情啊 2012-09-17 17:25:15
你的感受态等于是只用山梨醇处理了，这样效果不好。我在资源帖上分享了毕赤酵母现做现用感受态和长期保存感受态的制备方法。转化效率都非常好。建议你去看看然后试试。

你的菌OD值才1.4，只离心了25mL，菌量太少了，感受态不要做的菌量太低。

另外，质粒线性化后不用去磷酸化，都是线性化产物直接转毕赤酵母的。

电转后要加500--1000uL的冰预冷1 M山梨醇后再复苏，如果涂MD板是不用复苏的，涂抗性板需要摇床复苏1 h后再涂板。

涂板200uL太少了点，本来菌少转化效率也低，就要多涂。

仅为交流。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2012-09-17 16:18:14
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