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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

[求助] pET28a 原核表达可以用NdeI酶切去除了T7 Tag吗?

由于我要表达的蛋白对应的DNA序列含有EcoRI HindIII,SalI,XholI;我研究了很久多克隆位点,只有BamHI,NdeI,NcoI是K Buffer,可以做双酶切,所以如题所问,求高手解答,谢谢

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坚强面对生活
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
loop00: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-07 22:22:27
loop00: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-09-11 09:16:40
切掉了,肯定的,但是前面有His标签,不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗?NdeI做克隆不需要加起始密码子。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-09-07 16:47:18
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-07 16:47:18
切掉了,肯定的,但是前面有His标签,不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗?NdeI做克隆不需要加起始密码子。

T7我无所谓的,不过今天听说NdeI不好切,不好连,我换了NheI和SacI,呵呵应该也可以的吧
坚强面对生活
3楼2012-09-07 22:22:17
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myfinalway

木虫 (正式写手)

现在内切酶技术已经很好了,你可以换公司的内切酶试试。很多公司的酶就是统一的buffer, 而像Nde I这种位点也比较好切了。
4楼2012-09-11 12:20:16
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小米不爱

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-07 16:47:18
切掉了,肯定的,但是前面有His标签,不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗?NdeI做克隆不需要加起始密码子。

你好,为什么PET28 选NdeI作酶切位点,克隆时不需要加起始密码子
5楼2018-03-05 16:17:07
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