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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pET28a 原核表达可以用NdeI酶切去除了T7 Tag吗？
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

[求助] pET28a 原核表达可以用NdeI酶切去除了T7 Tag吗？

由于我要表达的蛋白对应的DNA序列含有EcoRI HindIII，SalI，XholI；我研究了很久多克隆位点，只有BamHI，NdeI，NcoI是K Buffer，可以做双酶切，所以如题所问，求高手解答，谢谢

无标题.jpg
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坚强面对生活
1楼 2012-09-07 06:08:00
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
loop00: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-07 22:22:27
loop00: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-09-11 09:16:40
切掉了，肯定的，但是前面有His标签，不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗？NdeI做克隆不需要加起始密码子。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小米不爱
2楼2012-09-07 16:47:18
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达
引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-07 16:47:18
切掉了，肯定的，但是前面有His标签，不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗？NdeI做克隆不需要加起始密码子。

T7我无所谓的，不过今天听说NdeI不好切，不好连，我换了NheI和SacI,呵呵应该也可以的吧
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坚强面对生活
3楼2012-09-07 22:22:17
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myfinalway

木虫 (正式写手)
现在内切酶技术已经很好了，你可以换公司的内切酶试试。很多公司的酶就是统一的buffer, 而像Nde I这种位点也比较好切了。
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4楼2012-09-11 12:20:16
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小米不爱

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-07 16:47:18
切掉了，肯定的，但是前面有His标签，不影响你后面做WB。T7 TAG对你很重要吗？NdeI做克隆不需要加起始密码子。

你好，为什么PET28 选NdeI作酶切位点，克隆时不需要加起始密码子
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5楼2018-03-05 16:17:07
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