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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物回收测序问题

我用简并引物扩增未知基因。设计了几对引物。都出现了目的条带。发现其中两对引物的产物长度比较长。因为我最终是要拿到这个未知基因的全长。我想选择最长的目的条带去测序。最后用RACE扩增全长的时候就能省点力气。这样对吗?还有,可不可以直接胶回收纯化送去测序?省掉TA克隆。我的目的片段长度1300BP.谢谢解惑。
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apple712

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-09-07 13:48:22
fengyunqb: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-09-09 11:36:31
原则上胶回收的产物可以直接拿去测序,可是考虑到你这个是race的中间序列,你用的兼并引物直接测序可能不一定成功,还是连到t载体上比较靠谱。另外,建议把所得到的片段大小跟你预期产物长度差不多的都拿去测序,这样会比较省时间。
3楼2012-09-06 15:36:19
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-09 11:36:19
可以直接产物拿去测序!
生物化学与分子生物学
2楼2012-09-06 14:22:10
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-09 11:36:43
你应该那你的目的条带去测序,其他的是杂带不能用,有可能是其他基因的,正好符合你的引物
每天坚持一点点,终会成功!相信自己
4楼2012-09-07 09:27:24
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1, 有帮助 2012-09-09 11:37:04
当然可以,不过要确定你的产物胶回收后浓度够。
5楼2012-09-07 10:15:46
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