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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物回收测序问题
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物回收测序问题

我用简并引物扩增未知基因。设计了几对引物。都出现了目的条带。发现其中两对引物的产物长度比较长。因为我最终是要拿到这个未知基因的全长。我想选择最长的目的条带去测序。最后用RACE扩增全长的时候就能省点力气。这样对吗？还有，可不可以直接胶回收纯化送去测序？省掉TA克隆。我的目的片段长度1300BP.谢谢解惑。
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1楼 2012-09-06 12:06:35
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-09 11:36:19
可以直接产物拿去测序！
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生物化学与分子生物学
2楼2012-09-06 14:22:10
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apple712

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-09-07 13:48:22
fengyunqb: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-09-09 11:36:31
原则上胶回收的产物可以直接拿去测序，可是考虑到你这个是race的中间序列，你用的兼并引物直接测序可能不一定成功，还是连到t载体上比较靠谱。另外，建议把所得到的片段大小跟你预期产物长度差不多的都拿去测序，这样会比较省时间。
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3楼2012-09-06 15:36:19
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-09 11:36:43
你应该那你的目的条带去测序，其他的是杂带不能用，有可能是其他基因的，正好符合你的引物
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
4楼2012-09-07 09:27:24
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1, ★有帮助 2012-09-09 11:37:04
当然可以，不过要确定你的产物胶回收后浓度够。
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5楼2012-09-07 10:15:46
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smoon0506

木虫 (正式写手)

大师

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-09-07 13:48:03
原则上胶回收的产物可以直接拿去测序，可是考虑到你这个是race的中间序列，你用的兼并引物直接测序可能不一定成功，还是连到t载体上比较靠谱。另外，建议把所得到的片段大小跟你预期产物长度差不多的都拿去测序，这样会比较省时间。
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每天都学习一点点，每天都进步一点点。
6楼2012-09-07 10:31:37
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