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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测序结果总出现问题
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adili

铁虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果总出现问题

PCR未纯化产物直接测序总出现结合问题，跑电泳没有杂带，除了克隆之外测序，还有什么途径可以解决？我的目的片段是1600bp

[ Last edited by adili on 2012-5-15 at 19:18 ]
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1楼 2012-05-15 19:16:22
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
adili: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-17 18:46:01
换引物。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
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2楼2012-05-16 09:17:27
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能你的片段是多拷贝的，而且拷贝之间大小差的不大，电泳上是看不出来的，我以前就遇到过这样的问题，还是建议做个克隆再测序。
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3楼2012-05-16 14:31:20
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lys6827

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你的描述，PCR产物没有经过纯化就去测序是不对的，肯定测出来有杂带，
不明白你说的，“结合问题”是指什么？

一般情况下，都是要对PCR产物进行纯化后，再进行测序，可以用PCR引物去测的
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4楼2012-05-18 09:17:47
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aiweiyiren

新虫 (初入文坛)
一般来说，PCR产物跑胶回收去测序是没问题的，你的测序结果不好，可能和你的PCR结构有关，查找看下有没有正向重复，反向重复，或者高GC，低GC都会有影响，还有测序的引物的Tm值，发夹结构等等
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5楼2012-06-02 23:01:40
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