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adili

铁虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果总出现问题

PCR未纯化产物直接测序总出现结合问题,跑电泳没有杂带,除了克隆之外测序,还有什么途径可以解决?我的目的片段是1600bp

[ Last edited by adili on 2012-5-15 at 19:18 ]
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耐心,细心,信心缺一不可
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
adili: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-17 18:46:01
换引物。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
2楼2012-05-16 09:17:27
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能你的片段是多拷贝的,而且拷贝之间大小差的不大,电泳上是看不出来的,我以前就遇到过这样的问题,还是建议做个克隆再测序。
3楼2012-05-16 14:31:20
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lys6827

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的描述,PCR产物没有经过纯化就去测序是不对的,肯定测出来有杂带,
不明白你说的,“结合问题”是指什么?

一般情况下,都是要对PCR产物进行纯化后,再进行测序,可以用PCR引物去测的
4楼2012-05-18 09:17:47
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aiweiyiren

新虫 (初入文坛)

一般来说,PCR产物跑胶回收去测序是没问题的,你的测序结果不好,可能和你的PCR结构有关,查找看下有没有正向重复,反向重复,或者高GC,低GC都会有影响,还有测序的引物的Tm值,发夹结构等等
5楼2012-06-02 23:01:40
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