24小时热门版块排行榜    

查看: 1259  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

adili

铁虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果总出现问题

PCR未纯化产物直接测序总出现结合问题,跑电泳没有杂带,除了克隆之外测序,还有什么途径可以解决?我的目的片段是1600bp

[ Last edited by adili on 2012-5-15 at 19:18 ]
回复此楼
耐心,细心,信心缺一不可
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能你的片段是多拷贝的,而且拷贝之间大小差的不大,电泳上是看不出来的,我以前就遇到过这样的问题,还是建议做个克隆再测序。
3楼2012-05-16 14:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
adili: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-17 18:46:01
换引物。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
2楼2012-05-16 09:17:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lys6827

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的描述,PCR产物没有经过纯化就去测序是不对的,肯定测出来有杂带,
不明白你说的,“结合问题”是指什么?

一般情况下,都是要对PCR产物进行纯化后,再进行测序,可以用PCR引物去测的
4楼2012-05-18 09:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aiweiyiren

新虫 (初入文坛)

一般来说,PCR产物跑胶回收去测序是没问题的,你的测序结果不好,可能和你的PCR结构有关,查找看下有没有正向重复,反向重复,或者高GC,低GC都会有影响,还有测序的引物的Tm值,发夹结构等等
5楼2012-06-02 23:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +3 archvillain 2026-08-15 3/150 2026-08-15 11:22 by 医学老男孩
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见