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jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] T-RFLP技术中,真菌的PCR问题 已有1人参与

T-RFLP技术中,大家真菌PCR都用的什么引物啊,我用的ITS1F/ITS4,一直都P不出来,要不是弥散状的条带,要不是二聚体,能参考一下大家的的体系和程序吗?我做的是土壤真菌的,不胜感激!
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jerryzyy

金虫 (小有名气)

怎么么有回答的呀,
3楼2012-09-02 09:28:42
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jmlilan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在做这个东西,提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来,换上这对引物P真菌就一直呈弥散状,体系条件全都优化了,还是没P出来,希望有大侠指导
4楼2012-09-13 16:35:36
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jerryzyy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jmlilan at 2012-09-13 16:35:36
我也在做这个东西,提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来,换上这对引物P真菌就一直呈弥散状,体系条件全都优化了,还是没P出来,希望有大侠指导

我之前有一段时间是有目的条带出现的,但是上下都有拖带,再调条件的话就又成弥散状的带了,我把酶什么的都换了还是不行,之前是用的镁离子分装的,后来又换成不分装的了,都不行,你现在能P才出来吗
5楼2012-10-03 10:28:46
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jmlilan

新虫 (初入文坛)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-08 13:39:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段时间是有目的条带出现的,但是上下都有拖带,再调条件的话就又成弥散状的带了,我把酶什么的都换了还是不行,之前是用的镁离子分装的,后来又换成不分装的了,都不行,你现在能P才出来吗...

我前两天换了个体系P出来了两次,也和你的情况差不多,目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了,要么是弥散状要么是只有二聚体,很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗
6楼2012-11-08 09:25:06
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