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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 真菌18s、its PCR失败原因
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690733791

木虫 (小有名气)

[求助] 真菌18s、its PCR失败原因

做了好几次了，换tap酶，换程序都P不出来，求高手能不能从这图中看出哪的问题指点一下，谢谢
图中从左边是四个its，右边是四个18s，中间是500bpmarker
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1楼 2012-07-08 09:12:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cgspider

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
taq 酶会有点抽，而且条件你要摸好；

试下mix嘛，很强大的，就是有时候杂带也多，目前你先把目的条带P出来再说杂带的事情吧。。。。
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你的能力撑不起你的野心
5楼2012-07-09 11:30:40
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普通回帖

lmqml24

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2012-07-08 09:36:36
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690733791

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lmqml24 at 2012-07-08 09:36:36
泳道杂质太多，是否与所提DNA有关，你可以跑个DNA的电泳图看看。

DNA之前跑了，虽然有些弥散，但是主要的那条带还是很亮的
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3楼2012-07-08 10:11:47
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vanstefanie

铁虫 (小有名气)
不懂，但我也要做，先看看
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Iknowucan'tliveonhopealone,butwithouthopelifeisnotworthliving.
4楼2012-07-08 10:56:47
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
18s 不好p,its挺好p的。你降低退火温度试试。
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请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
6楼2012-07-09 12:59:08
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
18S和ITS应该很好扩增，就算DNA提的很烂也能扩出来，所以你要检查你的引物序列，还有就是你的菌有没有纯化好，是不是真菌
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7楼2012-07-09 17:27:23
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zhenlisha

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图看不出来哪里出现问题，zl把体系和程序写出了，大家才能帮你
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8楼2012-07-10 08:53:20
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690733791

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kiruwa at 2012-07-09 12:59:08
18s 不好p,its挺好p的。你降低退火温度试试。

最低降到40度了，还是p不出来
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9楼2012-07-10 10:46:52
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690733791

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhenlisha at 2012-07-10 08:53:20
图看不出来哪里出现问题，zl把体系和程序写出了，大家才能帮你

体系：ddH2O 29.8μL; 10*PCRbuffer 5μL；（2.5μM）dNTP 8.0μL;(10μM)上下引物各1μL；taq（5μ/μL）0.5μL;模板 2μL
程序：94℃ 2min,30cycles(98℃,10s;50℃,30s;72℃,50s for ITS / 1min 50s for 18S),72℃ 10min,4℃ stored
注：引物都为通用引物
麻烦了
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10楼2012-07-10 10:56:40
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