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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 真菌18s、its PCR失败原因
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xmckyltwx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板量太大，还有就是模板浓度太高~~
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成功的起点是坚信，成功的终点是坚持~~
11楼2012-07-10 21:24:21
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zhenlisha

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 690733791 at 2012-07-10 10:56:40
体系：ddH2O 29.8μL; 10*PCRbuffer 5μL；（2.5μM）dNTP 8.0μL;(10μM)上下引物各1μL；taq（5μ/μL）0.5μL;模板 2μL
程序：94℃ 2min,30cycles(98℃,10s;50℃,30s;72℃,50s for ITS / 1min 50s for 18S),7 ...

我原来侧过ITS，体系dNTP 5uL，模版3uL；程序95℃ 5min，40循环（95℃30s，55℃ 30s，72℃ 1min），72℃ 10min，4℃ store
还有我是手提的，没用过试剂盒，最后DNA析出可以明显看到，lz先改下程序试试吧
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12楼2012-07-11 09:07:33
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