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690733791

木虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 2707.8
散金: 3
帖子: 144
在线: 45.2小时
虫号: 1406490
注册: 2011-09-18
性别: GG
专业: 临床免疫学检验

[求助] 真菌18s、its PCR失败原因

做了好几次了，换tap酶，换程序都P不出来，求高手能不能从这图中看出哪的问题指点一下，谢谢
图中从左边是四个its，右边是四个18s，中间是500bpmarker

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1楼2012-07-08 09:12:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhenlisha

银虫 (小有名气)

应助: 11 (小学生)
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在线: 38.8小时
虫号: 1421444
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性别: MM
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

引用回帖:

10楼: Originally posted by 690733791 at 2012-07-10 10:56:40
体系：ddH2O 29.8μL; 10*PCRbuffer 5μL；（2.5μM）dNTP 8.0μL;(10μM)上下引物各1μL；taq（5μ/μL）0.5μL;模板 2μL
程序：94℃ 2min,30cycles(98℃,10s;50℃,30s;72℃,50s for ITS / 1min 50s for 18S),7 ...

我原来侧过ITS，体系dNTP 5uL，模版3uL；程序95℃ 5min，40循环（95℃30s，55℃ 30s，72℃ 1min），72℃ 10min，4℃ store
还有我是手提的，没用过试剂盒，最后DNA析出可以明显看到，lz先改下程序试试吧