应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】18s全长pcr问题~
61/1返回列表
查看: 976  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

djrhewc

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】18s全长pcr问题~ 已有2人参与

如题，正在做沉积物DNA18s全长扩增，引物采用NS1和NS8，现在什么也没扩出来，而用传统分离方法从沉积物中分离出的单菌做18s扩增却可以正常扩出来，而且效果还不错，这是不是可以说明引物和反应体系以及条件都没有问题，有问题的是模板DNA？如果是这样的话，应该怎样来处理模板?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-08 11:44:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)
有人能指点下么？
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-10 16:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
18S能够形成复杂的二级结构，想一次扩增全长是很有困难的，建议分段扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-12-10 17:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-12-10 17:10:01:
18S能够形成复杂的二级结构，想一次扩增全长是很有困难的，建议分段扩增。

分段扩增？18s还不到2000bp，应该不需要用到吧
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-15 15:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-15 17:53:24
引用回帖:
Originally posted by djrhewc at 2010-12-15 15:48:48:

分段扩增？18s还不到2000bp，应该不需要用到吧

尽管长度对PCR来说不算长，但对这样种基因，分段对于后续克隆和测序都很有好处。我做过18S全长扩增，用TAKALA的GC buffer比较好扩增出来，但克隆和测序很难进行。后来做28S（约3.7Kb）我分成8段来扩增，顺利很多。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-12-15 16:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-12-15 16:27:42:


尽管长度对PCR来说不算长，但对这样种基因，分段对于后续克隆和测序都很有好处。我做过18S全长扩增，用TAKALA的GC buffer比较好扩增出来，但克隆和测序很难进行。后来做28S（约3.7Kb）我分成8段来扩增，顺利很 ...

好的，尝试一下,谢谢！
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-15 19:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 djrhewc 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 336求调剂 +3 rmc8866 2026-03-21 3/150 2026-03-21 11:16 by 求调剂zz
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭