应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-RFLP技术中，真菌的PCR问题
121/2返回列表12下一页
查看: 1659  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] T-RFLP技术中，真菌的PCR问题 已有1人参与

T-RFLP技术中，大家真菌PCR都用的什么引物啊，我用的ITS1F/ITS4,一直都P不出来，要不是弥散状的条带，要不是二聚体，能参考一下大家的的体系和程序吗？我做的是土壤真菌的，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-02 08:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
谢谢你啊
回复此楼
2楼2012-09-02 09:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
怎么么有回答的呀，
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-02 09:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在做这个东西，提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来，换上这对引物P真菌就一直呈弥散状，体系条件全都优化了，还是没P出来，希望有大侠指导
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-13 16:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jmlilan at 2012-09-13 16:35:36
我也在做这个东西，提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来，换上这对引物P真菌就一直呈弥散状，体系条件全都优化了，还是没P出来，希望有大侠指导

我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-03 10:28:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)
★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-08 13:39:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗...

我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-08 09:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗...

我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-08 09:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jmlilan at 2012-11-08 09:25:06
我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗...

不好意思啊，我刚看到，我明天给你发我的那个体系，那个也只是有目的条带，但是上下都有拖带的，不知道能不能帮到你
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-12 20:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-11-12 20:26:23
不好意思啊，我刚看到，我明天给你发我的那个体系，那个也只是有目的条带，但是上下都有拖带的，不知道能不能帮到你...

我用的是这个体系和程序，但是上下也是有拖带的，只是目的条带还是有的，你参考一下吧，用的是天根的酶和dNTPs，buffer：5，镁离子：4，dNTPs：4，Primer：1*2，DNA：3，Taq0.8，水：31.2;94度：7min，（94度：1min，56度：1min，72度：1.5min）30个循环，72度：5min
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-13 08:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-11-14 16:24:41
我之前用的康为的PCRmix 12.5ul mix， 引物1.5ul ，DNA各1ul，1ul BSA，水7.5ul
条件：94度 5min,94  1min ，55 45s，72  1min，32循环，72  10min
P出来过两次，有二聚体和非特异性条带，但是目的条带还是很不错的（没法上图片，遗憾），但重复不出来了，你也可以试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-14 09:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jerryzyy 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 8/400 2026-08-17 12:45 by a441914426
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 13/650 2026-08-17 12:33 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭