应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-RFLP技术中，真菌的PCR问题
121/2返回列表12下一页
查看: 1363  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] T-RFLP技术中，真菌的PCR问题 已有1人参与

T-RFLP技术中，大家真菌PCR都用的什么引物啊，我用的ITS1F/ITS4,一直都P不出来，要不是弥散状的条带，要不是二聚体，能参考一下大家的的体系和程序吗？我做的是土壤真菌的，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-02 08:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
谢谢你啊
回复此楼
2楼2012-09-02 09:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
怎么么有回答的呀，
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-02 09:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在做这个东西，提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来，换上这对引物P真菌就一直呈弥散状，体系条件全都优化了，还是没P出来，希望有大侠指导
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-13 16:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jmlilan at 2012-09-13 16:35:36
我也在做这个东西，提出来的DNA做细菌的PCR很容易就能P出来，换上这对引物P真菌就一直呈弥散状，体系条件全都优化了，还是没P出来，希望有大侠指导

我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-03 10:28:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)
★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-08 13:39:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗...

我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-08 09:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段时间是有目的条带出现的，但是上下都有拖带，再调条件的话就又成弥散状的带了，我把酶什么的都换了还是不行，之前是用的镁离子分装的，后来又换成不分装的了，都不行，你现在能P才出来吗...

我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-08 09:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jmlilan at 2012-11-08 09:25:06
我前两天换了个体系P出来了两次，也和你的情况差不多，目的条带还可以但是有非特异性条带、引物二聚体和拖尾。我再P就P不出来了，要么是弥散状要么是只有二聚体，很郁闷。能参考下你之前P出来的体系和条件吗...

不好意思啊，我刚看到，我明天给你发我的那个体系，那个也只是有目的条带，但是上下都有拖带的，不知道能不能帮到你
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-12 20:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jerryzyy at 2012-11-12 20:26:23
不好意思啊，我刚看到，我明天给你发我的那个体系，那个也只是有目的条带，但是上下都有拖带的，不知道能不能帮到你...

我用的是这个体系和程序，但是上下也是有拖带的，只是目的条带还是有的，你参考一下吧，用的是天根的酶和dNTPs，buffer：5，镁离子：4，dNTPs：4，Primer：1*2，DNA：3，Taq0.8，水：31.2;94度：7min，（94度：1min，56度：1min，72度：1.5min）30个循环，72度：5min
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-13 08:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmlilan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-11-14 16:24:41
我之前用的康为的PCRmix 12.5ul mix， 引物1.5ul ，DNA各1ul，1ul BSA，水7.5ul
条件：94度 5min,94  1min ，55 45s，72  1min，32循环，72  10min
P出来过两次，有二聚体和非特异性条带，但是目的条带还是很不错的（没法上图片，遗憾），但重复不出来了，你也可以试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-14 09:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jerryzyy 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +8 曦熙兮 2026-03-15 8/400 2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 274求调剂0856材料化工 +13 z2839474511 2026-03-11 14/700 2026-03-17 16:51 by share_joy
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭