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hzxm0316

铁虫 (初入文坛)

[求助] 转化后菌液PCR鉴定,没有目的条带

PCR时得到目的片段800bp,亮且单一,可是连接转化后,再菌液PCR鉴定,却始终只有200bp左右的条带,是怎么回事啊?有两次菌液鉴定得到800bp的单一亮条带,可是将测序结果提交到NCBI比对,却是没有找到相似序列?为什么就是转化不出目的序列呢?哪位大侠路过,请帮忙解答,谢谢!

(载体为PUCm-T Vecter;宿主为E.coli 5a)
(菌液鉴定:M13通用引物)
  实验均按照生工生物T-载体PCR产物克隆试剂盒上规定操作
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jasminezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-30 13:12:12
如果你测序后获得800bp,但是比对没有同源性序列,说明是一个新序列。
如果测序结果只有200,只能说明你连接上的片段不对,或者是假阳性。最好,菌落PCR验证时,用通用引物和你自己的特异引物同时扩增来验证。

你所说的同时用通用引物和特异性引物来扩增是指做两个PCR对照还是加在同一管里进行PCR?
15楼2013-01-04 21:05:18
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