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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增的特异性条带是啥意思？
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ccxj99

银虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增的特异性条带是啥意思？ 已有5人参与

是在PCR中扩增前还是扩增后确定特异性条带的啊？
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1楼 2012-08-28 15:02:59
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三十不惑

铜虫 (小有名气)
★
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理论上讲，合理的引物进行目的基因的PCR扩增，扩增后电泳仅会出现一条目标片段。如果在电泳时出现多条非目的片段的条带，即为非特异性条带。
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2楼2012-08-28 15:14:14
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ccxj99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-28 15:14:14
理论上讲，合理的引物进行目的基因的PCR扩增，扩增后电泳仅会出现一条目标片段。如果在电泳时出现多条非目的片段的条带，即为非特异性条带。

特异性片段是什么意思，在扩增前就确定吗？ 还是扩增前只能确定基因？
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3楼2012-08-28 15:16:55
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三十不惑

铜虫 (小有名气)
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-28 19:39:31
所谓的特异性片段即是指你想要扩增得到的片段。 在你设计PCR引物的时候就应该知道你扩出来的是什么了，你想要扩出来的就是目的片段也即是特异性片段
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4楼2012-08-28 15:39:48
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ccxj99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-28 15:39:48
所谓的特异性片段即是指你想要扩增得到的片段。 在你设计PCR引物的时候就应该知道你扩出来的是什么了，你想要扩出来的就是目的片段也即是特异性片段

假如我知道全场基因，如何确定特异性片段？ 还是只要是基因中的某段就行？
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5楼2012-08-28 16:03:56
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三十不惑

铜虫 (小有名气)
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amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:39:33
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-28 19:39:43
这个要看你实验目的，你是想得到什么片段。如果你想得到全长，那就用全长引物进行扩增，得到的全长片段就是特异性片段。如果你用部分引物进行扩增，那得到的部分片段就是特异性片段。
特异性与非特异性是对立的。理论上讲用一对正确的引物进行扩增只可能得到一个片段，但如果得到了两个，那那个正确的片段就是特异性的，不正确的片段就是非特异性的片段。正确与不正确一般我们是通过片段的长度来判断的，你使用正确的引物进行PCR扩增，必然只能得到一个序列，这个序列的长度是固定的不可变的。你对PCR产物进行电泳，如果条带正好在这个位置，那你可以认为这个产物就是特异性的，如果不在这个位置或者在这个位置之外还有其他的位置有条带，那这些都是非特异性的。
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6楼2012-08-28 16:54:00
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
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笼统的说，就是你设计的上下游引物之间的模板序列。
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7楼2012-08-29 09:08:54
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★
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就是PCR扩增出来的已知片段
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8楼2012-08-30 08:01:49
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
★
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就是你想得到的目的片段，即上下游引物之间的那段，理论上讲你设计的引物是特异性的，PCR得到的是一条条带，即目的条带，如果有多条，那其他的就是非特异性条带。。。。。。。
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9楼2012-08-30 08:56:13
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WHY67

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-28 16:54:00
这个要看你实验目的，你是想得到什么片段。如果你想得到全长，那就用全长引物进行扩增，得到的全长片段就是特异性片段。如果你用部分引物进行扩增，那得到的部分片段就是特异性片段。
特异性与非特异性是对立的。理 ...

你好，我想请问一下，就是我做的植物DNA，我根本不知道这个DNA应该跑到哪个位置，那我怎么判断哪个位置就应该是特异性条带呢？谢谢你，希望您回复一下，我最近为了我这个实验也是操碎了心。我是菜鸟级别的。
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10楼2018-12-05 15:56:44
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