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ccxj99

银虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增的特异性条带是啥意思?已有5人参与

是在PCR中扩增前还是扩增后确定特异性条带的啊?
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三十不惑

铜虫 (小有名气)

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amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:39:33
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-28 19:39:43
这个要看你实验目的,你是想得到什么片段。如果你想得到全长,那就用全长引物进行扩增,得到的全长片段就是特异性片段。如果你用部分引物进行扩增,那得到的部分片段就是特异性片段。
特异性与非特异性是对立的。理论上讲用一对正确的引物进行扩增只可能得到一个片段,但如果得到了两个,那那个正确的片段就是特异性的,不正确的片段就是非特异性的片段。正确与不正确一般我们是通过片段的长度来判断的,你使用正确的引物进行PCR扩增,必然只能得到一个序列,这个序列的长度是固定的不可变的。你对PCR产物进行电泳,如果条带正好在这个位置,那你可以认为这个产物就是特异性的,如果不在这个位置或者在这个位置之外还有其他的位置有条带,那这些都是非特异性的。
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6楼2012-08-28 16:54:00
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三十不惑

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
理论上讲,合理的引物进行目的基因的PCR扩增,扩增后电泳仅会出现一条目标片段。如果在电泳时出现多条非目的片段的条带,即为非特异性条带。
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2楼2012-08-28 15:14:14
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ccxj99

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-28 15:14:14
理论上讲,合理的引物进行目的基因的PCR扩增,扩增后电泳仅会出现一条目标片段。如果在电泳时出现多条非目的片段的条带,即为非特异性条带。

特异性片段是什么意思,在扩增前就确定吗? 还是扩增前只能确定基因?
3楼2012-08-28 15:16:55
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三十不惑

铜虫 (小有名气)

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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-28 19:39:31
所谓的特异性片段即是指你想要扩增得到的片段。 在你设计PCR引物的时候就应该知道你扩出来的是什么了,你想要扩出来的就是目的片段也即是特异性片段
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4楼2012-08-28 15:39:48
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