| 查看: 1665 | 回复: 8 | |||
| 本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
新手入门，想问一下关于未知基因的表达
|
|||
| 如题，如果我知道一株菌有某种功能，但是相关的基因却没有报道过，如何才能把这个基因找出来克隆至模式菌株中表达？ 新手入门，谢谢各位指教！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 基因克隆与表达 |
» 猜你喜欢
FileCode能看出啥？
已经有23人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有36人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有9人回复
-
2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B?
已经有10人回复
-
不应该看fileCode
已经有6人回复
-
好奇怪的filecode
已经有6人回复
-
长年满屏的广告，版主太不责任了。基金也等的急
已经有4人回复
-
filecode
已经有15人回复
-
职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊
已经有4人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于基因和质粒连接后质粒大小问题
已经有3人回复
- 新手，想问一下
已经有12人回复
- 想询问一下“某基因”和“某基因-like”的差别? 跪求大神详细解答！
已经有4人回复
- 根据参考文献的的引物和条件，怎么确定目的基因的大小，是什么原因
已经有6人回复
- 我想问一下如果用三条引物同时去扩增一个目的基因。结果会怎样？
已经有8人回复
- 某种生物特有的基因叫什么？
已经有4人回复
- 想问一下恒定表达载体，瞬时表达表达载体怎么区分？
已经有4人回复
- 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！
已经有17人回复
- 如何扩增某一功能蛋白的未知基因
已经有19人回复
- 目的基因合成在大肠杆菌里能表达么？
已经有3人回复
- 目的基因表达载体的构建问题~请指教
已经有6人回复
- Realtime PCR 内参与目的基因问题
已经有11人回复
- 已知一个性状，怎样知道相应的基因序列
已经有4人回复
- 请问一下关于芯片分析中差异基因的问题。。。
已经有7人回复
- 蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点……
已经有19人回复
- 建基因文库是为什么？弱弱的问一下，新手
已经有11人回复
- 怎么筛选植物抗性基因
已经有10人回复
jinpeng_6118
木虫 (正式写手)
- MicEPI: 2
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 5027
- 散金: 25
- 红花: 2
- 帖子: 856
- 在线: 147.9小时
- 虫号: 1019189
- 注册: 2010-05-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
不客气，我觉得不是真核生物的话，直接构建DNA文库，更方便一些 
9楼2012-08-31 18:41:04
2楼2012-08-28 15:26:30
3楼2012-08-28 20:31:17
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zdwxxw: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢了，很有帮助，可能以后还会有什么问题，到时再打搅您，请不吝赐教！再次表示感谢！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-29 07:45:48
zdwxxw: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢了，很有帮助，可能以后还会有什么问题，到时再打搅您，请不吝赐教！再次表示感谢！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-29 07:45:48
|
可以的。研究得少的东西容易出成果。我现在能想到的有两种方法： 当然，最先要做的是把这种菌株筛出来，因为一般的菌株并不会过量产一种酶，或者表达这种酶的高活性。如果你通过诱变甚至定向进化的方法，可能是①解除其调控，使酶过量表达；②酶活提高，酶学性质也提高了。如果是①的情况，该酶本身的性质可能并没有改变，只是调控限制被解除了，但是做克隆表达也是可以尝试的；如果是②的情况，说明酶的基因改变导致内部结构发生改变，这种酶做克隆表达是很有价值的。但我认为，无论哪种情况，都可以做克隆表达。然后怎样获得该酶基因，大概我知道的有两种： （1）我上面所说的，你可以分析一下“少数几种菌的产酶基因被报道过”的这些菌株中，该酶基因的一致程度，如果基因前面几十个碱基和最后几十个碱基是相似的，则可以根据这些序列设计（兼并）引物，以你筛出的菌的基因组为模版进行pcr调出基因。后面的操作是很模式化的（不同实验室有区别），pcr得到目的基因→胶回收→加A→纯化→连接T载体→转化JM109→保藏甘油管、提质粒、质粒测序→转化表达载体→发酵做酶学性质分析。 （2）如果你不知道基因，则需要将蛋白纯化出来，测定蛋白N端、C端蛋白质序列，根据序列设计兼并引物，按（1）的步骤调取基因。 应该还有其他方法，你可以看看分子生物学的教材，看别人用什么方法调基因。 |
4楼2012-08-28 21:25:19
