应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 新手入门，想问一下关于未知基因的表达
51/1返回列表
查看: 1363  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 新手入门，想问一下关于未知基因的表达

如题，如果我知道一株菌有某种功能，但是相关的基因却没有报道过，如何才能把这个基因找出来克隆至模式菌株中表达？ 新手入门，谢谢各位指教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

基因克隆与表达

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
1楼 2012-08-28 14:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sketch at 2012-08-28 15:26:30
通过文献知道这种功能的代谢途径，即确定是表达了哪个基因→在NCBI上查找此菌的其他亚类的此基因基因序列，通过对比序列设计引物（有可能是兼并引物）→提取此菌基因组，通过pcr获得基因→与T载体连接，转化入模式菌 ...

情况是这样的，我正在查找课题，我想筛一株产酶的菌，然后将其产酶基因进行克隆并高效表达。但是这方面的研究比较少，只有少数几种菌的产酶基因被报道过，如果报道过的还好；我怕筛出来其他的菌种，那样该怎么办呢？  不知道表达的清不清楚
赞一下 回复此楼
踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
3楼2012-08-28 20:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

sketch

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zdwxxw: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-08-28 20:25:43
通过文献知道这种功能的代谢途径，即确定是表达了哪个基因→在NCBI上查找此菌的其他亚类的此基因基因序列，通过对比序列设计引物（有可能是兼并引物）→提取此菌基因组，通过pcr获得基因→与T载体连接，转化入模式菌种→提出质粒，测序→测序结果正确后，转化入表达菌种。

这是一般流程，你要具体说明一下你的情况。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-28 15:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sketch

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zdwxxw: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢了，很有帮助，可能以后还会有什么问题，到时再打搅您，请不吝赐教！再次表示感谢！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-29 07:45:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by zdwxxw at 2012-08-28 20:31:17
情况是这样的，我正在查找课题，我想筛一株产酶的菌，然后将其产酶基因进行克隆并高效表达。但是这方面的研究比较少，只有少数几种菌的产酶基因被报道过，如果报道过的还好；我怕筛出来其他的菌种，那样该怎么办呢 ...

可以的。研究得少的东西容易出成果。我现在能想到的有两种方法：
当然，最先要做的是把这种菌株筛出来，因为一般的菌株并不会过量产一种酶，或者表达这种酶的高活性。如果你通过诱变甚至定向进化的方法，可能是①解除其调控，使酶过量表达；②酶活提高，酶学性质也提高了。如果是①的情况，该酶本身的性质可能并没有改变，只是调控限制被解除了，但是做克隆表达也是可以尝试的；如果是②的情况，说明酶的基因改变导致内部结构发生改变，这种酶做克隆表达是很有价值的。但我认为，无论哪种情况，都可以做克隆表达。然后怎样获得该酶基因，大概我知道的有两种：
（1）我上面所说的，你可以分析一下“少数几种菌的产酶基因被报道过”的这些菌株中，该酶基因的一致程度，如果基因前面几十个碱基和最后几十个碱基是相似的，则可以根据这些序列设计（兼并）引物，以你筛出的菌的基因组为模版进行pcr调出基因。后面的操作是很模式化的（不同实验室有区别），pcr得到目的基因→胶回收→加A→纯化→连接T载体→转化JM109→保藏甘油管、提质粒、质粒测序→转化表达载体→发酵做酶学性质分析。

（2）如果你不知道基因，则需要将蛋白纯化出来，测定蛋白N端、C端蛋白质序列，根据序列设计兼并引物，按（1）的步骤调取基因。

应该还有其他方法，你可以看看分子生物学的教材，看别人用什么方法调基因。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-28 21:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sketch

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zdwxxw: 金币+10, ★有帮助, 多谢，有劳了！ 2012-08-28 21:33:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by zdwxxw at 2012-08-28 20:31:17
情况是这样的，我正在查找课题，我想筛一株产酶的菌，然后将其产酶基因进行克隆并高效表达。但是这方面的研究比较少，只有少数几种菌的产酶基因被报道过，如果报道过的还好；我怕筛出来其他的菌种，那样该怎么办呢 ...

筛出来其他菌株没有关系，到时候可以做一个16sRNA鉴定菌株，然后一般的菌ncbi上都能找到基因组，而且里面很多基因都是注释了的，一般能找到你的那种酶对应的基因，这样就可以Pcr把基因调出来了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-28 21:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +4 梁梁校校 2026-03-19 4/200 2026-03-20 00:03 by 23Postgrad
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +3 lemonzzn 2026-03-17 3/150 2026-03-19 23:58 by 23Postgrad
[考研] 0856调剂，是学校就去 +6 sllhht 2026-03-19 7/350 2026-03-19 19:50 by 制度的
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭