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zjt829

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白电泳结果帮忙分析

SDS-page电泳跑出的结果如下，请大家帮忙分析一下原因吧，谢了~
蛋白：植物组织蛋白提取液（用tris-HCl的方法提的，然后直接与上样缓冲液混合之后上样）
最左边marker：170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶
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淡泊志宁静远
1楼 2012-08-23 19:22:47
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zjt829

木虫 (正式写手)
为什么没人回答呢
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淡泊志宁静远
2楼2012-08-23 20:37:54
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2, ★有帮助 2012-08-24 10:57:27
你的marker能跑出来，说明你的胶没问题。
但是从你的胶结果中看，你的样品似乎处理的不好，不知你怎么处理的，说出来好让大家出出主意。
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3楼2012-08-24 09:58:33
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2, ★有帮助, 植物组织蛋白提取方法。Tris-HCl法 2012-08-24 11:03:40
你提取的蛋白有问题吧！现在看来你是什么蛋白也没有。
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4楼2012-08-24 10:11:04
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-24 09:58:33
你的marker能跑出来，说明你的胶没问题。
但是从你的胶结果中看，你的样品似乎处理的不好，不知你怎么处理的，说出来好让大家出出主意。

这个从胶里看来应该蛋白量足够多了吧？
样品处理过程：Tris-HC法提取植物组织蛋白后，10000rpm4度离心30min，取上清，真空浓缩（终溶液甘油比重较大，影响？），然后上样，上样缓冲液就是普通的page上样缓冲液，含甘油sdstris盐酸等，20ul的上样量，
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淡泊志宁静远
5楼2012-08-24 11:02:29
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zjt829: 金币+5, ★有帮助, 多谢建议。提取的是总蛋白，跟对照看有毒物质对蛋白的影响 2012-08-24 11:16:10
小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-08-24 13:52:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by zjt829 at 2012-08-24 11:02:29
这个从胶里看来应该蛋白量足够多了吧？
样品处理过程：Tris-HC法提取植物组织蛋白后，10000rpm4度离心30min，取上清，真空浓缩（终溶液甘油比重较大，影响？），然后上样，上样缓冲液就是普通的page上样缓冲液，含 ...

从胶上看，蛋白量是没问题的。
样品处理中甘油影响不大，再说没甘油，样品在胶孔沉不下去。植物组织蛋白我没提取过，是不是先的把组织捣碎，用Tris-HCl去浸泡，之后离心取上清浓缩。
我觉得，你在离心之前要取点样，1:1加上样buffer，96度加热个10-15分钟，之后再离心，点样时候只点上清部分的样。同时将你10000rpm4度离心30min，浓缩后的样品也加热点样，两个样做一下对比。
还有，不知道你跑胶是要看什么，总蛋白还是某种蛋白。还是你的蛋白分子量是超过170kd的。
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6楼2012-08-24 11:13:23
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先试试，不行再找原因想办法
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7楼2012-08-24 11:22:08
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希望腾腾

新虫 (初入文坛)
我也想做植物可溶性蛋白的电泳 请问，您后续怎么处理的样品？结果好吗？感谢指导。
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8楼2014-10-31 10:08:25
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