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zjt829

木虫 (正式写手)

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[求助] 蛋白电泳结果帮忙分析

SDS-page电泳跑出的结果如下，请大家帮忙分析一下原因吧，谢了~
蛋白：植物组织蛋白提取液（用tris-HCl的方法提的，然后直接与上样缓冲液混合之后上样）
最左边marker：170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

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淡泊志宁静远

1楼 2012-08-23 19:22:47

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dshlove

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zjt829: 金币+5, ★有帮助, 多谢建议。提取的是总蛋白，跟对照看有毒物质对蛋白的影响 2012-08-24 11:16:10
小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-08-24 13:52:09

引用回帖:

5楼: Originally posted by zjt829 at 2012-08-24 11:02:29
这个从胶里看来应该蛋白量足够多了吧？
样品处理过程：Tris-HC法提取植物组织蛋白后，10000rpm4度离心30min，取上清，真空浓缩（终溶液甘油比重较大，影响？），然后上样，上样缓冲液就是普通的page上样缓冲液，含 ...

从胶上看，蛋白量是没问题的。
样品处理中甘油影响不大，再说没甘油，样品在胶孔沉不下去。植物组织蛋白我没提取过，是不是先的把组织捣碎，用Tris-HCl去浸泡，之后离心取上清浓缩。
我觉得，你在离心之前要取点样，1:1加上样buffer，96度加热个10-15分钟，之后再离心，点样时候只点上清部分的样。同时将你10000rpm4度离心30min，浓缩后的样品也加热点样，两个样做一下对比。
还有，不知道你跑胶是要看什么，总蛋白还是某种蛋白。还是你的蛋白分子量是超过170kd的。