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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 酶解时所用的酶液

做实验需要酶解，配的酶液要求是用0.22μm微孔滤膜抽滤灭菌的滤膜是用有机系的还是水系的？我用的水系的用抽滤机抽一下午就出来几滴。 另外抽滤灭菌完还需要高压灭菌吗？
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1楼 2012-08-23 18:24:07
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starseacow

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-23 20:27:01
a71840584: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-24 17:04:55
没有使用有机溶剂，就用水膜。楼主所说的不好抽滤，是否是由于酶液中不溶杂质太多？楼主最好检查一下酶溶解介质是否合适。在对酶活性要求不是很严格场合，可以考虑低速离心后再抽滤灭菌。另外，酶液不多，直接注射器抽滤即可。0.22微米抽滤除菌后不需高压，一高压你的酶就彻底失活了。
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2楼2012-08-23 18:57:31
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-23 18:57:31
没有使用有机溶剂，就用水膜。楼主所说的不好抽滤，是否是由于酶液中不溶杂质太多？楼主最好检查一下酶溶解介质是否合适。在对酶活性要求不是很严格场合，可以考虑低速离心后再抽滤灭菌。另外，酶液不多，直接注射器 ...

嗯，酶液很浑浊，我加入酶后就浑浊好像不溶的样子，杂志好像把滤膜都给堵住了，我该怎么办呢？先用滤纸过滤下吗？那样会不会把酶都给过滤掉了？我是按这个方法配的你看看有问题吗?
(1)酶液
1％纤维素酶
1％果胶酶
0.7mol/L甘露醇
0.7mmol/LKH2PO4
10mmol/LCaCl2•2H2O
pH6.8—7.0
这样配可以吗需要溶多久？另外我想问一下这个酶液需要现用现配吗？这些酶都不便宜但每次用的不多，用一次就扔掉怪可惜，谢谢哈
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3楼2012-08-23 19:38:14
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starseacow

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking: 回帖置顶 2012-08-23 20:27:06
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-23 20:27:11
你是用的体系PH值偏高，我看到溶解这两种酶用于除去植物细胞壁，一般ph在5.6-6，你最好再核对一遍文献。这两种酶在水中都应该是可以溶解的，你也可以试试先将它们溶解在水中再和其他试剂混合。
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4楼2012-08-23 19:55:09
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a71840584

金虫 (正式写手)
amisking: 回帖置顶 2012-08-23 20:27:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-23 19:55:09
你是用的体系PH值偏高，我看到溶解这两种酶用于除去植物细胞壁，一般ph在5.6-6，你最好再核对一遍文献。这两种酶在水中都应该是可以溶解的，你也可以试试先将它们溶解在水中再和其他试剂混合。

哦好谢谢你，我再去试试，另外就是那个这个酶液抽滤灭菌后能放多久？是不是用一次就不能再用了？
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5楼2012-08-23 19:58:12
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starseacow

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引用回帖:
5楼: Originally posted by a71840584 at 2012-08-23 19:58:12
哦好谢谢你，我再去试试，另外就是那个这个酶液抽滤灭菌后能放多久？是不是用一次就不能再用了？...

超净台打开，操作注意，可以重复使用。不过保险起见，最好现用现配现过滤
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6楼2012-08-23 20:26:56
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-23 20:26:56
超净台打开，操作注意，可以重复使用。不过保险起见，最好现用现配现过滤...

高手在不，我的纤维素酶和果胶酶咋就不溶解呢？都溶了一夜了，pH也调过了，我用的纤维素酶是绿色木酶，果胶酶好像是日本的，有啥好办法吗，不溶能用吗？
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7楼2012-08-24 08:49:02
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starseacow

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引用回帖:
7楼: Originally posted by a71840584 at 2012-08-24 08:49:02
高手在不，我的纤维素酶和果胶酶咋就不溶解呢？都溶了一夜了，pH也调过了，我用的纤维素酶是绿色木酶，果胶酶好像是日本的，有啥好办法吗，不溶能用吗？...

如果很久都不能溶解，那可能是酶中杂质难以溶解，以前我用国药的纤维素酶时遇到过这种情况，最后就2000 rpm稍微离心，取上清用
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8楼2012-08-24 16:02:31
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