[求助] 求助！大肠杆菌转化不长菌落~

6楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 13:20:45
几点意见：
1，质粒就用初始浓度的就好了，1μl足够了。不能用枪吹打，用手指轻弹小离心管外壁就行了，混匀之后放置半小时。
2，应该放37度摇床，220rpm差不多，1.5小时。
3，没必要离心，就直接取100μl涂板就行 ...

5楼: Originally posted by crusoe at 2012-08-21 12:57:00
第一步中的用枪轻轻混匀是不是不妥？应该是先混匀再在冰上放置30min吧。

4楼: Originally posted by yesucao at 2012-08-21 12:43:21
1、加入质粒的时候，感受态应该是处于冰水混合的状态时是最好的，不要等它全融化了再加；
2、质粒1微升的加入量有点少，可以适当多加点，3-4微升；
3、42度热激90s后，立即冰浴；
4、大肠杆菌摇床是在37度，转速 ...

3楼: Originally posted by tanglian8655 at 2012-08-21 12:05:21
我觉得你转化之后，培养的温度，转速和时间都可以修改一下，可以调成37℃，250rpm培养2.5h，培养之后只需要进行短暂离心，不需要离心那么久，
你涂好的平板最好是平放半小时使菌液充分吸收后在倒置培养，
42℃应激 ...

21楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2012-08-22 08:02:04
你看看你的抗性用错没。。。。。。我就干过这种事儿。。。。。。。质粒转化的效率和连接转化相比是灰常灰常高的，基本上我们就用肉眼可见的那么一丁点，浓度并不是很重要，有点就能进去。然后涂板的时候只涂1ul。。 ...

16楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 16:21:24
那是要在你的感受态转化效率很高的情况下，再说，哪有那么多理想情况啊。不要舍不得质粒啊。...