应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！大肠杆菌转化不长菌落~
292/3返回列表上一页123下一页
查看: 8619  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tanglian8655

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by nongdaylf at 2012-08-21 14:36:13
有人说浓度只要是pg就可以了，是么，还有的说小于10ng，也有的说100ng，应该是多少呢。...

你是指的哪个浓度呢，转化后培养一段时间之后的浓度么
赞一下 回复此楼
11楼2012-08-21 14:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crusoe

木虫 (正式写手)
nongdaylf: 回帖置顶 2012-08-22 17:45:20
引用回帖:
8楼: Originally posted by nongdaylf at 2012-08-21 14:35:50
谢谢，我的平板一点菌都没有涨。
有人说浓度只要是pg就可以了，是么，还有的说小于10ng，也有的说100ng，应该是多少呢。...

化转的话应该是10ng左右吧，电转可以是pg级。
看看你的抗性有没有弄错。
赞一下 回复此楼
12楼2012-08-21 15:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-21 16:08:18
42度热激改为90s，复苏应该在37度。涂板先离心再涂板是没有问题的。不过上清适当丢少一些，最后有300涂板为宜。
个人认为你的步骤中热激时间和复苏温度是最大的问题。
赞一下 回复此楼
13楼2012-08-21 15:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验，积极应助 2012-08-21 16:08:37
热转化，42度热击45s，我以前转的长的都很好，50ul的感受态细胞，加入不超过10ngDNA，体积不超过细胞体积的5%，复苏要在37度，200-250rpm，一个小时足够了，涂板时可以离心去上清，最好做个梯度，我们实验室一般不离心，直接取100ul菌液涂板，希望可以帮到你
赞一下 回复此楼
14楼2012-08-21 15:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

450104402

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
验证过你的感受态细胞了吗？还有你的质粒的抗性是什么，会不会搞错
赞一下 回复此楼
15楼2012-08-21 16:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by nongdaylf at 2012-08-21 14:35:41
谢谢，我的平板一点菌都没有涨。
有人说浓度只要是pg就可以了，是么，还有的说小于10ng，也有的说100ng，应该是多少呢。...

那是要在你的感受态转化效率很高的情况下，再说，哪有那么多理想情况啊。不要舍不得质粒啊。
赞一下 回复此楼
16楼2012-08-21 16:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

police2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nongdaylf at 2012-08-21 14:35:41
谢谢，我的平板一点菌都没有涨。
有人说浓度只要是pg就可以了，是么，还有的说小于10ng，也有的说100ng，应该是多少呢。...

跟你自己的感受态细胞的效率有关，效率越高需要的越少，一般化学转化的话，1ng会长100个左右吧。
赞一下 回复此楼
17楼2012-08-21 16:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
18楼2012-08-21 17:17:35
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

烟涛微茫

铁杆木虫 (文坛精英)

卡牌大师

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1。加入质粒时，感受态细胞应该是处于冰浴（冰水混合最好），不要等它全融化了再加。
2。42度热激90s后，立即冰浴；
赞一下 回复此楼
心之所善，九死未悔
19楼2012-08-21 22:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:06:22
转化步骤没有大问题，就是第一步加入质粒后混匀后再冰浴。
主要看看你载体是什么抗性，是不是抗性搞错了。
如果还有质粒干粉的话，用双蒸水稀释后取1ul转化试试看。
赞一下 回复此楼
20楼2012-08-21 23:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nongdaylf 的主题更新
292/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-01 15:04 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 15:04 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-01 14:50 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 14:35 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 14:29 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 14:24 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 7/350 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 15/750 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 10:27 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭