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[求助]
求助！大肠杆菌转化不长菌落~
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我做的是空载体的大肠杆菌转化，然后挑单菌落提取质粒。 现在已经做了三次，但是都没有出结果~ 材料如下： 空载体是5微升质粒干粉加进40微升Eluent（Eluent是Takala公司质粒提取试剂盒中的）稀释，初始浓度为160.5ng/μl，然后分别稀释10倍（测试后浓度为15.0ng/μl）和100倍（7.0ng/μl，应该是浓度太低，测得不精确）。 感受态是Takala的DH5α 具体步骤如下： 1。分别取以上三种各1μl加入到50μl感受态中，冰浴30min，用枪头轻轻混匀。 2。在42℃中放置45s。 3。放入冰浴中2min。 4。在操作台中加入500μlLB培养基无抗体。 5。在30摄氏度培养箱中200转1h。 6。5000rpm/min中离心1min。 7。在无菌操作台中取出上清液450μl，然后剩余的100μl全部涂板（Amp抗性），倒置到37℃培养箱中。 结果：不涨菌落。。 问题： 是不是浓度太大的问题，还是操作步骤有问题，求各位指导 [ Last edited by 1949stone on 2012-8-24 at 17:05 ] |
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15楼2012-08-21 16:11:50