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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取有白色沉淀，跑胶却没条带，啥原因？
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 质粒提取有白色沉淀，跑胶却没条带，啥原因？

质粒提取有白色沉淀，干燥后几乎透明，加30微升的灭菌水溶的，5微升跑胶，却是白板，啥原因？
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1楼 2012-07-30 11:14:46
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
amisking: 回帖置顶 2012-07-30 20:12:23
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-07-30 12:07:54
楼主可以把你的操作步骤发上来才好分析，跑胶没有带只能说明没提出质粒来。

2、取培养好的菌液1.5ml至EP管中，10,000r/min离心60s,弃上清;
3、加入100μl预冷的Solution I，剧烈震荡混匀；
4、加入200μl新配置的SolutionII,轻柔滚动EP管直至管中菌体溶液呈透明，冰水浴3~5min;
5、加入150μl预冷的SolutionIII,轻柔颠倒混匀，冰水浴5~10min，12,000r/min 离心15min,弃沉淀，将上清移入另一新EP管中；
6、加入等体积氯仿，轻柔颠倒混匀，10,000r/min 离心15min,取上清液体于另一新EP管中；
7、加入0.1V的醋酸钠，2V的无水乙醇，反复颠倒混匀，于-80℃沉淀20~30min，12,000r/min 离心15min;
8、弃上清，将EP管倒扣吸水纸上，直至EP管中液体流尽；
9、将沉淀放置在真空冷冻干燥机中干燥3~5min;
10、加入20~30μl ddH2O。
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6楼2012-07-30 12:10:46
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒提取里面有干燥  灭菌水溶的步骤吗？
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2楼2012-07-30 11:21:20
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gelois

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你提的质粒是很大的那种吗？当初我提Bacmid的时候出现过这样的情况。你异丙醇沉淀之后用70%的乙醇洗了么？
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3楼2012-07-30 11:31:08
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主可以把你的操作步骤发上来才好分析，跑胶没有带只能说明没提出质粒来。
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4楼2012-07-30 12:07:54
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