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uuu555000

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[交流] 质粒提取有白色沉淀,跑胶却没条带,啥原因?

质粒提取有白色沉淀,干燥后几乎透明,加30微升的灭菌水溶的,5微升跑胶,却是白板,啥原因?
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uuu555000

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引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-07-30 11:31:08
你提的质粒是很大的那种吗?当初我提Bacmid的时候出现过这样的情况。你异丙醇沉淀之后用70%的乙醇洗了么?

2倍无水乙醇沉淀,70%的乙醇洗了
5楼2012-07-30 12:08:10
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amisking: 回帖置顶 2012-07-30 20:12:23
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-07-30 12:07:54
楼主可以把你的操作步骤发上来才好分析,跑胶没有带只能说明没提出质粒来。

2、取培养好的菌液1.5ml至EP管中,10,000r/min离心60s,弃上清;
3、加入100μl预冷的Solution I,剧烈震荡混匀;
4、加入200μl新配置的SolutionII,轻柔滚动EP管直至管中菌体溶液呈透明,冰水浴3~5min;
5、加入150μl预冷的SolutionIII,轻柔颠倒混匀,冰水浴5~10min,12,000r/min 离心15min,弃沉淀,将上清移入另一新EP管中;
6、加入等体积氯仿,轻柔颠倒混匀,10,000r/min 离心15min,取上清液体于另一新EP管中;
7、加入0.1V的醋酸钠,2V的无水乙醇,反复颠倒混匀,于-80℃沉淀20~30min,12,000r/min 离心15min;
8、弃上清,将EP管倒扣吸水纸上,直至EP管中液体流尽;
9、将沉淀放置在真空冷冻干燥机中干燥3~5min;
10、加入20~30μl ddH2O。
6楼2012-07-30 12:10:46
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