应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR相关问题
51/1返回列表
查看: 1721  |  回复: 16
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR相关问题

大神帮我！
目前在做心脏组织的逆转录PCR。遇到的问题，首先用trizol提取总RNA，测其吸光度比值260/280在1.5左右，远大不到1.8-2.0。有人说是因为我用DEC水稀释做空白，用TE会好些，暂时还没有实践。比值小于1.8应该是有蛋白污染吧？然后如果继续做下面的逆转录和扩增有什么影响呢？
    扩增时问题，内参表达不好（内参为gapdh）。并且阴性对照管也有表达！？ct值在25到28左右！这个问题是不是很严重？
    大神指导一下吧！
用的枪头，EP管都是直接购买的无酶的产品，有一段时间了。会不会应经被污染有RNA酶呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-07-18 15:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-18 19:09:40
RNA能不能用主要看电泳，有没有降解。OD值看的是纯度，不纯的话可能会抑制PCR。
阴性对照ct值在25到28左右，得确定是不是扩增产物，还是引物二聚体？可以跑下电泳。
如果是产物的话，那就是污染了。

就是说，纯度不够会影响后面的扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-18 22:36:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-19 15:15:11
RNA能不能用主要看电泳，有没有降解。OD值看的是纯度，不纯的话可能会抑制PCR。
阴性对照ct值在25到28左右，得确定是不是扩增产物，还是引物二聚体？可以跑下电泳。
如果是产物的话，那就是污染了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-18 19:09:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-19 15:15:22
做荧光定量的pcr必须保证rna的完整性，提取rna时，所有的注意事项，都必须小心处理。不能图省事。提取rna用的所有东西，最好用depc水处理。祝你好运。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
4楼2012-07-18 22:37:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-18 22:37:09
做荧光定量的pcr必须保证rna的完整性，提取rna时，所有的注意事项，都必须小心处理。不能图省事。提取rna用的所有东西，最好用depc水处理。祝你好运。

RNA的完整性只能通过电泳来检查吗？我们用的枪头和EP管都是无酶的也要用DEPC水处理吗？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-18 22:39:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭