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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

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[交流] 小女子新人一枚，初做巢式PCR，出了点儿问题，求助！已有3人参与

师兄做的p出来的条带很亮很好，为什么我做的阳性对照有条带而且非常的弱，我的样品啥都没有，郁闷啊！！！
两步pcr都是25微升的体系，12.5微升的酶，上下游引物都是0.5微升，模版是2微升。。。哪里出问题了，难道是我的操作？
点样飘出来了还是什么？

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少壮不努力，长大pcr

1楼 2012-07-15 15:27:50

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313638350

铁虫 (小有名气)

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你师兄搞怪在里面加了东西

5楼2012-07-15 23:28:37

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l68266152

银虫 (小有名气)

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scelab: 金币+2, 谢谢交流 2012-07-15 17:13:55

电泳图片传上来看看，你所谓的12.5ul的是mix吧？不是酶吧？阳性对照是用什么做的对照？各个组分有没有充分融化？引物有没有问题？

相信自己

2楼2012-07-15 16:02:20

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reallpf

木虫 (正式写手)

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你用的应该是2 X mix，那应该很好P出来啊。不过看你的条件应该出在引物的量，25uL的体系一般加2uL引物，个人建议。另外PCR结果不好时也要根据结果从PCR条件来考虑，同时你也可以减小PCR体积来试试。

3楼2012-07-15 17:38:11

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reallpf

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补充一下，如果你的模版是基因组或者PCR产物，2uL量有点大，也需要调整。如果有电泳图最好了。

4楼2012-07-15 17:39:36

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