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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[交流] 小女子新人一枚,初做巢式PCR,出了点儿问题,求助!已有3人参与

师兄做的p出来的条带很亮很好,为什么我做的阳性对照有条带而且非常的弱,我的样品啥都没有,郁闷啊!!!
两步pcr都是25微升的体系,12.5微升的酶,上下游引物都是0.5微升,模版是2微升。。。哪里出问题了,难道是我的操作?
点样飘出来了还是什么?
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少壮不努力,长大pcr
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l68266152

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
scelab: 金币+2, 谢谢交流 2012-07-15 17:13:55
电泳图片传上来看看,你所谓的12.5ul的是mix吧?不是酶吧?阳性对照是用什么做的对照?各个组分有没有充分融化?引物有没有问题?
相信自己
2楼2012-07-15 16:02:20
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reallpf

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用的应该是2 X mix,那应该很好P出来啊。不过看你的条件应该出在引物的量,25uL的体系一般加2uL引物,个人建议。另外PCR结果不好时也要根据结果从PCR条件来考虑,同时你也可以减小PCR体积来试试。
3楼2012-07-15 17:38:11
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reallpf

木虫 (正式写手)

补充一下,如果你的模版是基因组或者PCR产物,2uL量有点大,也需要调整。如果有电泳图最好了。
4楼2012-07-15 17:39:36
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313638350

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你师兄搞怪 在里面加了东西
5楼2012-07-15 23:28:37
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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-15 17:39:36
补充一下,如果你的模版是基因组或者PCR产物,2uL量有点大,也需要调整。如果有电泳图最好了。

好的,我再p下试试
少壮不努力,长大pcr
6楼2012-07-16 09:17:02
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